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方法二.皮肤移植 实验证明动物具有接受或排斥所植皮肤的能力。每个近交系的全部个体在遗传上高度纯合,所以,同品系的个体间能互相接受皮肤移植;而不同品系的个体间植皮就会互相排斥。 皮肤移植也是的常用的遗传质量检测方法,在国家推荐标准(GB/T14927.2-2001)《实验动物近交系小鼠\大鼠皮肤移植法》中,对该方法的基本操作步骤有详细的介绍和规定。 皮肤移植示意图 小鼠和大鼠的检测中普遍采用的是快速、有效的尾部皮肤移植法。 植皮后至少观察100天,只有在100天以上植皮双方均不发生排斥,才能证实待测小鼠或大鼠的遗传纯合性。 在对已知品系检测时,若急性排斥占手术例数30%,须重新考虑采样,以确认是技术性还是其他原因造成的结果。 供 体 受 体 移植结果 近交系 同品系同性别 接受 近交系 不同品系 排斥 近交系 本品系同其他品系杂交F1 接受 近交系♀ 同品系♂ 接受 近交系♂ 同品系♀ 排斥 杂交F1 F1亲代品系 排斥 杂交F1 杂交F2 接受 杂交F2 杂交F1 排斥(少数接受) 实验动物皮肤移植规律 皮肤移植法优点: 易掌握、高度灵敏、经济、不需昂贵设备、对植皮接果的排斥或接受容易判断。 皮肤移植法不足:该方法费时:需观察100天后才能作出判断; 饲养植皮动物需一定饲养空间; 会出现一些系技术或其他非免疫因素植皮实验失败。 该方法不是鉴别新品系的理想方法。 方法三.下颌骨形态学分析 下颌骨形态是高度遗传的性状,由多态性位点确定。下颌骨的形态和大小在小鼠的近交系间存在明显差异,所以,下颌骨分析是一种合理的方法。 该方法是一种灵敏和有效的鉴别和检测亚系变异(源于遗传混杂和突变)的技术。 正常环境因素及饲养管理对下颌骨形态几乎没有什么影响, 50日龄后下颌骨基本上不再生长,其形态也不再发生变化。 检测前,制作测量用的标准直角坐标底板, 在近交系核心群中随机取60日龄以上的成年雄鼠, 每次取样10只为1组,制备下颌骨标本后, 在显微镜下,放大10倍测量在直角坐标底板上下颌骨11个形态特征参考点的距离。 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 下颌骨测试示意图 将所测量值的平均数作统计分析,利用判别函数确定下颌骨形态。如果测量值集中,则表明在被测小鼠间无显著的遗传差异。 下颌骨形态分析是一种灵敏、经济、简便、可同时检验大量的遗传位点的遗传监测方法。 若配以扫描机将下颌骨形态扫入电脑,经电脑测量其形态特征参考点的距离,并由电脑完成统计分析,既可减少人为误差,还可加快统计分析的速度。 方法四.毛色基交配测试 小鼠毛色主要受A、B、C、D四个等位基因控制,它们分别在2、4、7、9号染色体上。 cc基因是其他毛色基因的上位基因。白化小鼠cc等位基因是已知的,A,B是待测基因。毛色基因交配测试可把隐性的毛色基因显示出来。 A-B-C-为野生色 A-bbC-为桂皮色 aaB-C-为黑色 aabbC-为棕色 基因型与毛色 ----cc 根据遗传学原理,被测个体与已知复隐性基因个体交配,可以从F1的毛色判断待测小鼠基因型; 如待测小鼠A、B位点是纯合的,则杂交F1的毛色只出现一种颜色。 将60-70日龄待测白化小鼠(雌性)与已知毛色基因结构的复隐性有色鼠(基因型为aabbCC,如DBA/2 ,俗称“标准鼠”)雄鼠交配,根据杂交F1的毛色确定待测小鼠主要毛色基因型,鉴定是否纯合。 举例1: 近交系BALB/c小鼠毛色基因测定 “标准鼠”:♂DBA/2, 基因型:aabbCC(棕色) 被测定鼠:♀BALB/c,基因型:????cc(待测定;白色) BALB/c DBA/2 ??c ??c abC 桂皮色AabbCc 桂皮色AabbCc abC 桂皮色AabbCc 桂皮色AabbCc 表现型为100%桂皮色, 结果: BALB/c毛色基因未污染,基因型为:AAbbcc。 举例2: 封闭群Ssm
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