第11章荧光法分解.pptVIP

第十一章 荧光分析法 主讲: 阿合买提江 荧光分析法 概述 当物质分子吸收光子能量而被激发，然后从激发态的最低振动能级返回到基态能级时所发射出的光称为荧光(fluorescence) 根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和物质含量测定的方法称为荧光分析法(fluorometry) 【内容提要】 1、 荧光分析法的基本原理。 2、 荧光定量分析方法。 3、荧光分光光度计和其他荧光分析技术。 第一节 荧光分析法的基本原理 一、分子荧光 （一）分子荧光的产生 1、分子的电子能级与激发过程 分子的基态 激发单重态：S 激发三重态：T 电子能级的多重性: M=2s+1 s为总自旋量子数 单重态与三重态的区别在于电子自旋 方向不同，激发三重态具有较低能级。 单重态与三重态 2、荧光的产生 振动弛豫： 它是指在同一电子能级中，电子由高振动能级转至低振动能级，而将多余的能量以热的形式发出。发生振动弛豫的时间为10-12s数量级。 荧光、磷光 能级图 → 振动弛豫 荧光、磷光 能级图 荧光、磷光 能级图 荧光、磷光 能级图 (二 )激发光谱曲线和荧光、磷光光谱曲线 荧光物质分子具有两个特征光谱：激发光谱和发射光谱。 绘制激发光谱曲线时，固定测量波长为荧光（或磷光）最大发射波长，然后改变激发波长，根据所测得的荧光（磷光）强度与激发光波长的关系，即可绘制 激发光谱曲线。 固定激发光波长为其最大激发波长，然后测定不同的波长时所发射的荧光或磷光强度，即可绘制荧光或磷光光谱曲线。 二、荧光与分子结构 （一）荧光寿命和荧光效率 1.光量子产率（荧光效率） 荧光量子产率也叫荧光效率或量子效率，它表示物质发射荧光的能力，通常用下式表示 ? = 发射荧光分子数 / 激发分子总数 或 ? = 发射荧光量子数 / 吸收光量子数 在产生荧光的过程中，涉及到许多辐射和无辐射跃迁过程，如荧光发射、内转移，系间窜跃和外转移等。很明显，荧光的量子产率，将与上述每一个过程的速率常数有关。 2.荧光寿命 除去激发光源后分子的荧光强度降低到最大荧光强度的1/e所需的时间 长共轭结构 （三）荧光试剂 作用：产生强荧光性产物 1. 荧光胺 2. 邻苯二甲醛 3. 1-二甲氨基-5-氯化磺酰萘 4. 测定无机离子的荧光试剂 3、溶液pH值 带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化合物的荧光与溶液的pH有关。不同的pH值，化合物所处状态不同，不同的化合物或化合物的分子与其离子在电子构型上有所不同，因此，它们的荧光强度与溶液的pH值有关。 本节内容小结 荧光光谱的特征 物质分子能发射荧光的两个必要条件 有机化合物分子结构与荧光的关系 长共轭结构 取代基 一、荧光强度与物质浓度的关系 二、定量分析方法 1．标准曲线法 配成一系列标准溶液，测定这些溶液的荧光强度，以荧光强度为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线。 绘制时，常采用系列中某一标准溶液作为基准，将空白溶液的荧光强度读数调至0％，将该标准溶液的荧光强度读数调至100％或50％，然后测定系列中其它各个标准溶液的荧光强度。 2．比例法 第三节 荧光分光光度计和其他荧光分析技术 一、荧光分光光度计 荧光分光光度计与紫外分光光度计的区别 其他荧光分析技术 同步荧光分析 本章小结 17、关于荧光光谱和激发光谱，叙述错误的是（ ） A. 荧光光谱的形状与