蛋白结晶技术解析.ppt

蛋白质结晶技术 Background 蛋白质的功能是基于蛋白质的三维结构，应用X-ray蛋白质的结构需要得到高质量的蛋白质晶体。 得到高质量的蛋白质晶体是蛋白质功能研究的瓶颈，严重制约着蛋白质工程、理性药物设计、合成疫苗设计等新型生物技术的发展。 蛋白结晶流程图 （电荷均一，大小均一） 蛋白质结晶过程 蛋白质结晶过程是一个有序化的过程，即溶液中无规律的分子转变成有规则排列状态的固体。 影响蛋白质溶解性的因素： 离子强度 PH和相反离子 温度 有机溶剂 改变溶液中以上因素可以使蛋白质在溶液中达到过饱和状态，从而形成晶核，晶核进一步生长成具有一定空间结构的晶体。 微量蒸汽扩散法（浓度增加） 平衡透析法（PH或离子强度） 一批结晶法（沉淀剂） 温度梯度结晶法（温度） 重复结晶法 结晶常用方法 悬滴法 坐滴法 Crystal Screen Kit 产品名称 货号 用途备注 Index Kit HR2-144 用于生物大分子结晶 Crystal Screen Kit HR2-110 用于蛋白质，核酸水溶性小分子结晶 Crystal Screen 2 Kit HR2-112 wizard Pegrx 1 HR2-082 用于生物大分子结晶 Pegrx 2 HR2-084 用于生物大分子结晶 Peg/Ion Screen Kit HR2-126 用于生物大分子结晶 Peg/Ion 2 Screen? HR2-098 用于生物大分子结晶 Saltrx Kit HR2-108 用于生物大分子结晶 Membfac Kit HR2-114 用于膜蛋白和溶解度有限的样品结晶 Crystal Screen Lite HR2-128 用于蛋白质，缩氨酸，核酸的结晶 Natrix Kit HR2-116 用于核酸和蛋白核酸复合物的结晶 Crystal Screen Cyro Kit HR2-122 用于蛋白质，可溶性缩氨酸，核酸和水溶性小分子的初次低温结晶 Nucleic Acid Mini Screen Kit HR2-118 用于核酸片段的结晶 Low Ionic Strength Screen HR2-120 用于完整单抗，单抗片段以及在低离子浓度下溶解度较低的样品结晶 Silver Bullet Silver Bullet Bio HR2-078 用于生物大分子的初次和二次结晶 HR2-080 Peg/Tacsimate Ph5.8 Crystallization Reagent HR2-090 Peg/Tacsimate Ph 6.8 Crystallization Reagent HR2-092 Peg/Tacsimate Ph 7.8 Crystallization Reagent HR2-094 Additive Screen? HR2-428 利用样品间和样品溶剂间相互作用来优化晶体生长和改变样品溶解度 膜蛋白结晶技术 膜蛋白可根据膜上的位置和分离的难易分为周边和本体两类。 膜蛋白有疏水和亲水两个部分，其非极性区域倾向于形成无序化聚合物，需要采用特殊的条件才能使膜蛋白形成晶体。 去垢剂（detergent）本身也像膜脂分子一样的两亲性结构，可以替代膜脂。 从膜蛋白的水溶液中形成膜蛋白晶体有两种可能的类型。 第一种类型的晶体一般很小，不能用于高分辨衍射的研究。 第二类晶体，从图中可以看出，蛋白质分子不能太小，否则极性区域接触不够。 蛋白质分子的大小无法改变，选择合适的去垢剂分子成为关键 主要参考书目 卢光莹.《生物大分子晶体学基础 第二版》.北京大学出版社. 梁栋材. 《X射线晶体学基础 第二版》.科学出版社. Barry s. selinsky. membrane protein protocols.Human Press. 联系方式 邮箱 kuni071@163.com * *