凝集反应(肥达反应、血型鉴定)详解.pptVIP

凝集反应 实验目的 掌握凝集反应原理 熟悉肥达试验的方法、凝集效价的判定及临床意义 抗原与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可见的凝集物，称之为凝集反应。 直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象。 间接凝集反应：将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。 直接凝集反应 颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象。 间接凝集反应 将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。 协同凝集实验 金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白(SPA)能与人及多种哺乳动物IgG类抗体的Fc段结合。IgG的Fc段与SPA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌表面，仍保持其抗体活性和特异性，当其与特异性抗原相遇时，出现凝集现象。称为协同凝集反应。 试管凝集试验——肥达反应 玻片凝集试验——ABO血型鉴定 肥达反应 肥达反应(widal reaction)是用已知的伤寒沙门菌的H抗原(鞭毛)和O抗原(菌体)以及甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌的H抗原的诊断菌液与病人血清做凝集试验，测定受检血清中有无相应的抗体以及抗体的效价，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或流行病学调查。 材料 伤寒沙门菌O、H菌液，甲型副伤寒沙门菌H菌液和肖氏沙门菌H菌液。 生理盐水和患者血清（10倍稀释），试管，1ml吸管，试管架，52℃水浴箱 方法 取洁净试管28支，分成4排，每排7支，依次编号。 于每个试管内加入生理盐水0.5ml。 在每排第一管各加患者血清0.5ml，进行倍比稀释。 结果 凝集程度：以“+”多少表示 。 （++++）上清液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。 （+++） 上清液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。 （++） 上液半混浊，细菌部分凝集。 （+） 上清液混浊，仅有小部分细菌凝集。 （-） 不凝集，液体呈乳状与对照管相同。 效价判定：以能出现“++”凝集现象的血清最高稀释度为该血清的凝集效价。 血清的凝集效价（滴度）：指能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（即“++”凝集）的血清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。一般认为，伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1:80以上，“H”抗体凝集效价在1:160以上，引起副伤寒的沙门菌H凝集效价在1:80以上才有诊断价值。 O与H抗体的诊断意义 O抗体：IgM H抗体：IgG ABO血型鉴定 根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A，B，AB，O型4种。 实验材料 载玻片、刺血针、消毒牙签、A型和B型标准血清、生理盐水、酒精棉球。 实验步骤 1．取一块清洁玻片，在其左右端分别用A、B做好标记。 2．在玻片一端滴加抗A型标准血清一滴，在另一端滴加抗B型标准血清. 3．穿刺手指取血，玻片的两端标准血清各加一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。 室温下静置，观察有无凝集现象， * * 金黄色葡萄球菌 可溶性抗原 凝集 抗体 直接凝集反应 1:1280 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 血清最终稀释度 1:128 1:64 1:32 1:16 1:8 1:4 稀释度 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 诊断菌液 1:64 1:32 1:16 1:8 1:4 1:2 稀释度 —— 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 受检血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 生理盐水 7 阴性对照 6 5 4 3 2 1 ml 弃去0.5ml 患病可能性小 ― ― 预防接种或非特异性回忆反应 ↑ ― 感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染 ― ↑ 肠热症 ↑ ↑ 诊断 H抗体 O抗体