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普通硅胶板薄层色谱测定水生生物脂质中 多不饱和脂肪酸含量及其预测 实验室的渔业技术，6-10-1九州大学农学部，箱崎，福冈812-81，日本 摘要: 我们设计了一个快速的方法用于从非多不饱和脂肪酸分离多不饱和脂肪酸（多不饱和脂肪酸，三烯）并预测了水生生物中多不饱和脂肪酸的总量。从31种脂质，包括海洋和淡水鱼，贝壳鱼类，海藻及其他水生动物，从陆地生物，酯基转移反应与甲醇钠在甲醇中的反应。由此产生的脂肪酸甲基酯，薄层色谱法分离商业上可用的纯硅胶板与溶剂正己烷乙醚/乙酸（95:5:1，通过体积）。所有分离的甲基酯，从水生生物测试两个点，而那些来自陆源，除了亚麻籽油，呈未解决的点。在上层较低点刮下从板上分开，它们的脂肪酸组合物用气 - 液色谱法确定。较低的点组分是多不饱和脂肪酸含有两个以上的双键，而较高的点组分是饱和脂肪酸，且含有单烯，大部分为二烯脂肪酸。当硅胶板上的斑点染色用考马斯亮蓝，多不饱和脂肪酸在水生生物中数量利用一个扫描光密度计测量。 对生理和心理的重要性的n-3多不饱和脂肪酸（多不饱和脂肪酸，三烯类）已确认存在于人类[1-2]和其他生物体中[3-5]。20:5n-3酸，可降低血压和胆固醇在血浆中含量[6-7]，抑制类二十烷酸的生产2系列，和增加形成类二十烷酸的3系列。二十二碳六烯酸，22:6n-3酸，特别是存在于高级哺乳动物组织，例如脑，视网膜，和精子中，酸已被阐明有一定职能作用和生物的必要性[8-13]。现在有一种海洋油需求不断增长，是n-3多不饱和脂肪酸的主要来源，它用于人类食品，医药品，和在工业的中间体。因此，有必要用简单和适当的分析方法对海洋油进行分离，鉴定和评价。 气-液色谱（GLC）和高效液相色谱是用于分离复杂天然脂肪酸混合物[14]的有效方法。曼戈尔德与Kammereck[15]等人认为：薄层色谱法（TLC）被广泛用于识别或制备脂肪酸和它们的衍生物[16]。通过薄层色谱法解决脂肪酸衍生物的不饱和度。正常的和取代的不饱和脂肪酸链在浸渍硝酸银的硅胶板上分离，延缓了迁移相对于较多的不饱和脂肪酸和更饱和的脂肪酸[17-18]。然而，在这些技术中步骤是乏味的，银制作的硝酸板是昂贵的。使用普通和高性能桑塔硅胶板，多不饱和脂肪酸甲基酯单不饱和脂肪酸得到良好的分离。 我们也利用传统的纯硅胶薄层色谱法打算设计一个简单，快速的方法，以区分从这些陆生，水生生物血脂源和多不饱和脂肪酸中的油脂的密度测量。 材料和方法 材料：五海鱼：竹荚鱼刺参（马鲭鱼），（红鲷鱼），（沙丁鱼）黄姑鱼 淡水鱼:彭泽鲫（鲫鱼），三块（鲮鱼），钩吻鳟，鳗鲡，鲤，香鱼，彭泽鲫 贝类：波纹巴非蛤小蛤，蛏（剃须刀蛤），和肉组织中，用于本实验中，购买主要来自当地的零售商店。七藻类：裙带菜孔石莼（绿紫菜），紫菜裙带菜（裙带菜），条斑紫菜，石毛，羊栖菜，马尾藻。提取的脂质通过均质化的组织，用氯仿/甲醇（2:1，体积/体积），根据Folch等人的方法[19-20]。种子油均购自和光纯药工业（大阪，日本）。鱿鱼肝油和其他油类捐赠M.医生古都，渔业实验室的研究站，九州大学（日本福冈）。甲基化 在螺杆端的脂质样品（15毫克）试管被溶解在苯（0.5毫升）和甲醇钠（1毫升）[21]TLC板发现各种生物体已购自E.默克公司（达姆施塔特，德国），马歇雷内格尔（诺依曼尼安德大街，德国），用Whatman纸有限公司（英格兰梅德斯通，），和光纯药工业株式会社制。该板被激活110℃ 1小时，使用前开发的乙醚/乙酸（95:5体积比）。该板是喷洒与50％0.02％Fluka公司化学试剂AG，Buchs20％[22]。30分钟后，将板从染色溶液中取出，浸渍在20％的甲醇中，并允许静置3分钟，温和搅拌。该板从溶液中去除污渍，在空气中干燥，使用一个扫描光密度计测量（CS-9300PC色谱扫描仪，岛津制作所，京都，日本）在600 nm处的反射模式下，从板的相邻位置上减去空白读数。 GLC 薄层点或带在紫外光线照射下（硅胶60 F254; E. Merck公司）分别标记。凝胶用氯仿萃取/甲醇（2:1，体积/体积），并在减压下除去溶剂。分析所得的残余物经GLC分析，使用气相色谱仪（岛津GC-14A;岛津制作所公司制造）配备有火焰电离检测器和毛细管柱（HR-SS-10，300.25 mm， Shinwakako的有限公司，京都，日本）柱温编程从150至220呈线性增加。关于色谱图的甲基酯，所采用常规的方法，及使用标准保留时间和等效的链长度，并用气相色谱/质谱（QP-5000; Shimadzu公司）。标准脂肪酸甲基酯14:0，16:08:0购买自Wako Pure化学工业公司，20:0和22:0是从GL科学株式会社（东京，日本），18:2n-6，18:3n-3，并20:4n-6 Sigma公