选修三专题一基因工程复习精读.ppt

基因工程概念 基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 新生物类型、生物产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程相关要点 基因工程相关要点 2、基本工具： “分子手术刀”: “分子缝合针”: 基因进入受体细胞的载体: 3、基本操作步骤： 运载体 DNA连接酶 限制性核酸内切酶 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建（核心） 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 黏性末端 黏性末端 1.限制性核酸内切酶 EcoRI 一、基因工程的基本工具 来源：原核生物 作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列（反向对称重复排列），切割特定切点（磷酸二酯键）。 结果：产生黏性末端（EcoRI）（碱基互补配对）或平末端（SmaI）。 1、限制性核酸内切酶----“分子手术刀” 2.DNA连接酶——“分子缝合针” 1)种类： 2)作用部位： E·coli DNA连接酶（黏性末端） T4 DNA连接酶 （黏性末端和平末端） 磷酸二酯键 DNA连接酶可把平末端或黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即相当于把梯子两边的扶手的断口连接起来，这样一个重组DNA分子就形成了。 对比DNA聚合酶 ①具有1至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入 ②在受体细胞中能复制并稳定保存 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择 ④对宿主细胞无害 作用：将外源基因送入受体细胞。 常用载体：拟核外环状DNA （质粒） 其他种类：λ噬菌体衍生物和动植物病毒 条件： 3.分子运载车——载体 质粒——细菌拟核DNA之外结构简单、能自主复制的很小的环状DNA分子。 小结 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 具一个或多个限制酶切位点 能在宿主细胞中自我复制并稳定存在 具标记基因 对宿主细胞无害 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 二、基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 （一）目的基因的提取 1.目的基因：主要是指___________________ 。 2.获取方法： 1）____________中获取目的基因 2）PCR反应扩增DNA 3）人工合成法：化学方法合成DNA片段（反转录法、直接合成法） 从基因文库 编码蛋白质的结构基因 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某生物的部分基因 某生物的全部基因 可以 部分可以 ⑴基因组文库与cDNA文库的构建 ⑵利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应（PCR） 模板DNA 4种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） 原理：DNA半保留复制 前提：一段已知目的基因的核苷酸序列 条件： 延伸(70℃ -75℃ ) 变性(90℃-95℃ ) 退火(55℃ -60℃ ) 过程： （二）基因表达载体构建 1、基因表达载体由 ________、______ ______、_______、 四部分组成。 目的基因 启动子 标记基因 终止子 2、启动子作用： 3、标记基因的作用： RNA聚合酶识别和结合的位点，启动转录的“开关”。 鉴别受体细胞中是否含有目的基因 ，从普通细胞中筛选出含目的基因的受体细胞 （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用_______________切断目的基因，使其产生 ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 重组质粒形成过程: 转化:目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 （三）将目的基因导入受体细胞 受体细胞种类 方法 植物细胞 动物细胞 微生