9-2目的基因的克隆解析.ppt

第五章 目的基因的分离克隆 基本概念 目的基因分离克隆的方法概述 基因文库技术分离目的基因 功能蛋白组技术分离目的基因 mRNA差别显示技术分离差别表达基因 插入突变分离克隆目的基因 酵母双杂交系统分离克隆目的基因 四、功能蛋白组技术分离目的基因 4.1基本概念：蛋白质组和功能蛋白质组 4.2蛋白质双向电泳技术 4.3功能蛋白氨基酸序列分析 4.4功能蛋白基因分离 蛋白质组是指“由一个细胞或一个组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质”。 功能蛋白质组是指那些可能涉及到特定功能机理的蛋白质群体。这群体可大可小，与特定功能及研究方法、手段及具体实验设计有关。各功能蛋白组的组合可描绘出生命细胞大致的蛋白组图谱。 4.2 蛋白质双向电泳技术 4.2.1 双向电泳原理 4.2.2 用于功能蛋白组研究的双向电泳系统 4.2.3 功能蛋白组双向电泳技术说明 蛋白质双向电泳技术 4.2.1 双向电泳原理：双向电泳是由两个单向电泳组合而成，在第一向电泳后再在与第一向垂直的方向上进行第二向电泳。双向电泳分离原理与组成它的两个单向电泳的分离原理基本相同。要获得良好分离效果，两个单向电泳的分离依据要有很大不同。 目前常用的单向电泳极其分离依据 PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳） SDS（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳） PG（孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳） IEF（等电聚焦-聚丙烯酰胺凝胶电泳） PAGE