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分光光度法 目录 第一节 基本原理 第二节 仪器结构 第三节 显色与测量条件的选择 第四节 723N型分光光度计操作维护 第一节 基本原理 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有: 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5 1000 m ,主要用于有机化合物结构鉴定。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200 400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400 750 nm ， 主要用于有色物质的定量分析。 光的吸收定律 1.朗伯—比耳定律 布格 Bouguer 和朗伯 Lambert 先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度成正比：A∝b 1852年比耳 Beer 又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有成正比的关系：A∝ c 二者的结合称为朗伯—比耳定律：当一束平行的单色光通过均匀、非散射的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。 朗伯—比耳定律 朗伯—比耳定律 是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量。它不仅适用于可见光，也适用于紫外光和红外光；不仅适用于均匀非散射的液体，也适用于固体和气体。 朗伯—比耳定律，数学表达式 其数学表达式为 式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度 b：液层厚度 光程长度 ，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol/L； ε：摩尔吸光系数，单位L/mol/cm； 摩尔吸光系数ε的讨论 摩尔吸光系数ε在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时,该溶液在某一波长下的吸光度； 摩尔吸光系数ε的讨论 （1）摩尔吸光系数是吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数； （2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关； （3）可作为定性鉴定的参数； （4）同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。 摩尔吸光系数ε的讨论 （5）εmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 ε 105 ： 超高灵敏； ε 6～10）×104 ：高灵敏； ε 2×104 ：不灵敏。 摩尔吸收系数和桑德尔灵敏度 桑德尔灵敏度指数：S （μg/cm 2 ） 在λmax 时，A 0.001 下，单位截面积光程内所能检测出来的吸光物质的最低含量。 最佳读数范围与最佳值 吸光度A与透光度T的关系: A ＝ －lg T 用仪器测定时应尽量使溶液透光度值在T % 20～65% ,最佳读数范围： A 0.70～0.20 可求出浓度相对误差最小时的透光度Tmin为： Tmin＝36.8%, Amin＝0.434 第二节 仪器结构 仪器基本组成 1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～1000 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 2.单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 3. 样品室（吸收池） 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池（玻璃能够吸收紫外光），可见区一般用玻璃池。 4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 5. 结果显示记录系统 检流计（721） 数字显示（7230） 微机进行仪器自动控制和结果处理 （723N是带微电脑智能化的分光光度计） 第三节 显色与测量条件的选择 显色反应：将待测组分转化成有色化合物的的反应。 M＋L＝ML 显色反应要求： （1）选择性好； （2）灵敏度高，ε 104； （3）有色化合物ML要稳定，不分解； （4） ML的组成要一定 （只ML 无MLn） ； （5） ML与 L 颜色差别大,吸收峰波长差：Δλ 60nm. 选择合适的参比溶液 为什么需要使用参比溶液？ 测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。 参比溶液的选择一般遵循以下原则： 参比溶液的选择 1．M、L 均无色，可用蒸馏水作参比。 2.