第四章基因工程的载体-质粒二课件.ppt

第三节λ噬菌体载体 一、λ噬菌体的分子生物学 　　 1 ? 噬菌体发育调节 ①吸附 ②立即早期转录 ③ 延迟早期转录 ④溶源和裂解的感染分化 ⑤进入裂解生长 ⑥溶源化 ? 噬菌体的可取代区 J 基因与 Cro 基因之间的 DNA 被 ga1 基因或 bio 基因替换后，不影响 λ 噬菌体裂解生长。这个区段约占λ噬菌体 DNA 的 1/3 ，主要包含控制λ噬菌体进入溶源状态的调节基因和功能基因 2 λ噬菌体载体的选择标记 2.1 基因组大小 重组λ噬菌体的基因组 DNA 太大或太小会影响其存活能力。外源 DNA 片段的大小将在 9-23kb 范围内 2.2 lacZ 基因 ?lacZ 基因也可用于 λ 噬菌体载体，通过插入或替换载体中的 β-半乳糖苷酶基因片段，在 IPTG/X-gal 平板上可通过噬菌斑的颜色，筛选重组噬菌体 λ噬菌体载体的选择标记 2.3 基因 cⅠ 失活 基因 cⅠ 是 λ 噬菌体的抑制基因，全面抑制并阻断基因的表达 。如果外源 DNA 片段插入基因 cⅠ 中，将高频率地使 E.coli 进入裂解生长状态。 2.4 Spi 筛选 通过λ噬菌体载体 DNA 上的 red 和 / 或 gam 基因的缺失或替换，可在 P2 噬菌体溶源性细菌中鉴别重组和非重组λ噬菌体。 3