实验三微生物染色观察预案.ppt

实验三 细菌的染色 一 油镜的使用 学习油镜的使用技术及维护的基本知识 初步认识细菌的基本形态 油镜使用的原理 油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 显微镜保养和使用中的注意事项 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 操作步骤 三 革兰氏染色 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、荚膜染色法等。 革兰氏染色（Gram stain） 1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+）和革兰氏阳性（G-） 革兰氏染色步骤: 1）结晶紫初染；2）碘液媒染； 3）酒精脱色； 4）番红复染 细菌的特殊形态结构 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 鞭毛：运动，菌落形态。 实验材料 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（2 day培养物） 革兰氏染色液一套 实验步骤 革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢染色 绘图、写实验报告 革兰氏染色的步骤 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 四 芽孢的染色 本实验安排 细菌三形永久片观察 简单染色：枯草芽孢（1d）。 革兰氏染色：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、斜面菌株。 芽孢染色：枯草芽孢（2d） 另外，每大组派两人从斜面挑取枯草芽孢（2d）于离心管，水浴锅中煮沸。 思考题 80页思考题第1题，84页思考题第1题。 下次内容：实验8、9 * * 油镜的使用 细菌的单染色法 细菌的革兰氏染色芽孢染色 实验目的 浸没油与玻璃的折射率相近 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 现场演示 1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察 2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 3.换片：另换新片，必须从第1条开始操作。 4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头 用油镜观察细菌三形永久装片。 ? 简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 ? 常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。 实验原理 二 细菌的简单染色 ? 常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 ? 当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。 实验原理 (continued) 细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 1、菌种 枯草芽孢杆菌1D培养物 2、染色剂 吕氏碱性美蓝染液 齐氏石碳酸复红染液 实验材料 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 操作步骤 四、实验步骤 无菌操作 菌悬液 涂片 干燥 滴加无菌水 固定 取菌苔 涂片 操作步骤（continued） 1、涂片 取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）生理盐水