分子生物学实验理.pptVIP

分子生物学实验原理 第一节 分子生物学发展概述 第二节 核酸的提取技术extractive technique of nucleic acid 第三节 核酸分子杂交技术 ⑵ 印迹方法 转移方法不同，可分为 ①斑点或狭缝印迹，即直接将核酸样品点样于固相支持物上； ②虹吸印迹法，利用毛细管虹吸作用，由转移缓冲液带动核酸分子转移到固相支持物上； ③电转印迹法，即利用电场力的作用将核酸带到固相支持物上； ④真空转移法，即利用真空抽滤作用，将核酸分子带到固相支持物上。 根据要转印核酸品种的不同，又可分为 Southern印迹法：是指将电泳分离的DNA从 凝胶中转移到固相支持物上的过程。 Northern印迹法：是指RNA的印迹过程。 步骤： a.DNA分子经限制内切酶酶切。酶切变成合适长度的DNA片段（根据实验目的而定，突变检测则短，定性定量则长）。一般理想的是0.5～10Kb，因片段大小直接影响转移效率。 b.在琼脂糖凝胶中进行电泳。分离DNA片段，经EB（溴化乙锭）染色后观察DNA片段大小，并与DNA分子量标准参照物比较（Marker）。记录或照像各DNA片段位置。尤其留意我们所感兴趣的DNA片段。 （琼脂糖电泳常用于核酸，一般为水平板电泳 SDS电泳常用于蛋白质，一般为垂直板电泳） Sou