制备小鼠去细胞拟胚体对Lewis肺癌细胞的促分化作用.docVIP

制备小鼠去细胞拟胚体对Lewis肺癌细胞的促分化作用 吕卫东1，蔡 琳2，张家东1，3，雷光焰1，刘志刚1，张新伟1，陆建荣2 (陕西省肿瘤医院，1胸外科，2病理科，陕西省西安市 710061；3陕西中医学院附属医院，陕西省咸阳市 712046) 引用本文：吕卫东，蔡琳，张家东，雷光焰，刘志刚，张新伟，陆建荣. 制备小鼠去细胞拟胚体对Lewis肺癌细胞的促分化作用[J].中国组织工程研究，2016，20(20):2972-2978. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.20.012 ORCID: 0000-0003-2685-4218(吕卫东) 文章快速阅读： 文题释义： 去细胞拟胚体：胚胎干细胞可在一定条件下分化成具有内、中、外3胚层结构的拟胚体，而拟胚体用去细胞技术处理后得到的脱细胞三维细胞外基质材料即为去细胞拟胚体，其可能因为保留拟胚体的细胞外基质成分、三维空间结构和生物机械性能而有拟胚体的一些功能。 三维培养：传统研究肿瘤发生的方法包括体外肿瘤细胞二维培养和建立体内鼠肿瘤模型，但是二者均有局限性：肿瘤细胞二维培养不能很好的反映体内肿瘤的微环境，而体内实验在控制单独细胞信号方面功能不足。体外三维培养能够克服以上不足。三维培养下肿瘤细胞的形态和表型类似于体内肿瘤，能够动态观察肿瘤细胞变化，已经被用于设定培养条件下肿瘤的发生、生长和转移的相关研究。 摘要 背景：胚胎干细胞或胚胎组织与癌细胞共培养，能够诱导癌细胞分化为正常上皮细胞或恶性程度降低，而去细胞拟胚体保留了胚胎组织的结构和重要细胞因子。 目的：成功制备一种来源于小鼠胚胎干细胞的去细胞拟胚体，探讨去细胞拟胚体在小鼠Lewis肺癌细胞体外三维培养中的作用。 方法：先将小鼠胚胎干细胞(D3)动态培养7 d后形成拟胚体，然后用十二烷基硫酸钠进行去细胞处理。小鼠Lewis肺癌细胞与去细胞拟胚体三维共培养7 d，对照组肺癌细胞在Matrigel上三维培养7 d。Ki67免疫组化染色检测细胞增殖情况，Western blot检测Paxillin，E-cadherin蛋白表达水平，RT-PCR检测Slug和E-cadherin mRNA表达水平。 结果与结论：①实验成功制备一种大小均匀的小鼠拟胚体，经十二烷基硫酸钠去细胞处理后，拟胚体的细胞成分完全去除；②小鼠Lewis肺癌细胞在Matrigel上三维培养7 d后形成球形的肿瘤多细胞球体，Ki67免疫组化染色阳性细胞比例高；小鼠Lewis肺癌细胞在去细胞拟胚体支架上三维培养7 d，可见肺癌细胞长入拟胚体，但Ki67阳性细胞比例明显降低；③相对于Matrigel组，去细胞拟胚体组的Paxillin吸光度小于Matrigel组(P 0.05)，而E-cadherin吸光度大于Matrigel组(P 0.05)；④去细胞拟胚体组的Slug mRNA表达明显低于Matrigel组(P 0.05)，而E-cadherin mRNA表达高于Matrigel组(P 0.05)；⑤结果表明，去细胞拟胚体对小鼠Lewis肺癌细胞在体外三维培养有促进分化作用。 关键词： 组织构建；组织工程；胚胎；去细胞；拟胚体；Lewis肺癌细胞；细胞外基质；生物材料；三维支架；三维培养；国家自然科学基金 主题词： 胚状体；细胞外基质；癌, Lewis肺；细胞系, 肿瘤；组织工程 基金资助： 国家自然科学基金资助项目；陕西省自然科学基金面上项目(2015JM8435) Acellular embryoid bodies in mice: preparation and effect of promoting differentiation of Lewis lung carcinoma cells Lv Wei-dong1, Cai Lin2, Zhang Jia-dong1, 3, Lei Guang-yan1, Liu Zhi-gang1, Zhang Xin-wei1, Lu Jian-rong2 (1Department of Thoracic Surgery, 2Department of Pathology, Tumor Hospital of Shaanxi, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China; 3Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, Shaanxi Province, China) Abstract BACKGROUND: Co-culture w