蛋白电泳+WB论述.doc

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳1、基本原理1.1电泳 溶液中的带电颗粒在电场作用下的移动大致受到三方面影响：a、颗粒性质：体积大小及形状、实际电荷数、解离强度等。b、环境：电解质或缓冲液的浓度、离子强度、pH值、粘度和温度。c、应用电场性质：电场强度。不同带电颗粒在同一电场中泳动速度不同，常用“泳动度”或“迁移率”来表示。指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度：μ= v/E =d/t U/I = dI/Ut μ 迁移率，v 颗粒迁移速度（cm/s或min），E电场强度或电势梯度（V/cm），d颗粒移动距离（cm），I支持物的有效长度（cm），U是支持物两端实际电压（V），t是通电时间。颗粒的迁移率可通过测量d、I、U、t计算出。影响迁移率的因素：（1）带电颗粒的性质：净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多，直径小而且近于球状，则泳动速度快，反之则慢。（2）电场强度（电位梯度）：指单位长度（cm）支持物体上的电位降，它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压（常压）电泳100—500V，电场强度为2—10V/cm，分离时间需要数小时、数天或更长。高压电泳500—1000V，电场强度20—200V/cm，电泳时间短。有时仅需几分钟，主要用于氨基酸、肽、核苷酸。由于电压增高电流增大需要冷却装置。（3）溶液的PH：溶