仙鹤草抗伤口感染实验设计方案.docVIP

仙鹤草叶抗伤口感染促进伤口愈合实验设计方案 一、实验原理和目的 伤口感染是创伤患者常见的并发症，包括创伤后局部感染和全身性感染。严重的创伤引起的全身性感染是发生脓毒症、脓毒性休克及多器官功能障碍的重要因素。引起伤口感染的病原微生物主要包括金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、链球菌、铜绿假单胞菌、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和无芽胞厌氧菌等Agrimonia pilosa的叶。全草含仙鹤草酚，仙鹤草内酯，木犀草苷，仙鹤草甲、乙、丙素，赛仙鹤草酚A-E，另含鞣质、甾醇、皂苷及挥发油等成分。性平，味苦、涩；有收敛止血，截疟，止痢，解毒等功效。仙鹤草及由仙鹤草的茎、叶所提取的仙鹤草素，其止血作用已为临床所证实，并早已制成各种剂型广泛应用于各种出血病症。近年来又将仙鹤草制成止血粉，用于外伤出血、内脏手术时出血或渗血。湖南民间常用仙鹤草鲜叶治疗外伤出血，该法有明显的止血、防止伤口感染、促进伤口愈合的作用。本实验主要通过研究仙鹤草鲜叶对伤口微生物的体外抑制实验和促进大鼠伤口模型愈合实验，来鉴定仙鹤草鲜叶对防止伤口感染和促进伤口愈合的效果。 二、实验步骤 1．仙鹤草叶抑菌实验 1.1药液的制备 （1）鲜叶药液的制备：取洁净的仙鹤草鲜叶50g，组织捣碎机捣碎，匀浆，取出，加水定容。 （2）鲜叶冻干粉药液的制备：洁净的仙鹤草鲜叶1kg，低温冷冻干燥，粉碎成冻干粉，低温保存。鲜叶冻干前测定鲜叶的含水量。取与50g鲜叶相当量的冻干粉，加水溶解定容。 （3）鲜叶+溶菌酶药液的制备：取洁净的仙鹤草鲜叶50g，组织捣碎机捣碎，匀浆，取出，加入一定量的溶菌酶，加蒸馏水定容。 （4）溶菌酶药液的制备：用与（3）相同量的溶菌酶，加蒸馏水定容。 （5）自制鲜叶药剂药液的制备：洁净的仙鹤草鲜叶50g，组织捣碎机捣碎，匀浆，取出，加入适量的其它物质，加水定容。 （6）对照组药液的制备：水 1.2 细菌的培养制备 将选定的实验菌株，接种普通琼脂培养基37 ℃培养24h，进行菌落形态观察并进行生化反应再次鉴定后备用。菌液浓度的配制方法为，挑取菌落用2~ 3mL无菌生理盐水校正至0.5麦氏比浊单位，使其含菌量为1.5 x 108 CFU /L。 1.3 抑菌效果的测定 （1）打孔法 在表面涂有菌液的平板上打孔 直径6mm ，用琼脂封孔底。向孔内加0.07 ml药液。于37℃培养24 h，测量抑菌圈直径。 （2）琼脂平板连续稀释法 以药液含药量为100 g/100ml，取其不同浓度 mg /ml 稀释液1 ml，分别加于定量肉汤琼脂中制成平板。冷凝后，对平板表面分区，向每区接种一接种环菌液。培养后，找出无菌生长的最低药物浓度 最小抑菌浓度，M IC 。 表1 仙鹤草叶抑菌实验记录表 菌种 材料 金黄色葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌链球菌铜绿假单胞菌破伤风梭菌产气荚膜梭菌无芽胞厌氧菌