百合体细胞胚.docVIP

体细胞胚 百合是世界四大切花之一，在世界上广泛栽培，深受人们喜爱。 现在百合育种常用远缘杂交的方式进行新品种的选育，基因工程技术运用在百合育种是较少，主要是因为百合组培直接再生植株，转化率低，产生嵌合体多，不适宜大规模的育种工作。 体细胞胚胎发生技术不仅使植物体的工厂化快繁成为现实 ，而且是为研究高效基因转化受体系统建立、种质保存、突变体筛选、人工种子研制、单倍体育种 、体细胞 胚 胎发 生与发育机理等方面提供了可能。 途径：外植体鳞片-诱导再生成小植株-小鳞片或小叶片-诱导愈伤组织-鉴定为胚性愈伤组织-进行农杆菌的介导转化-检测-将转化后的胚性愈伤组织固体或悬浮培养诱导形成体细胞胚-再生得到转基因植株 体细胞胚：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成与合子胚相类似的结构胚状体一般专指在组织培养条件下产生的非合子胚以区别于自然发生的珠心胚及其他通过无融合生殖和由合子胚分裂产生的胚（见多胚现象）。诱导外植体形成愈伤组织—诱导愈伤组织胚性化—体细胞胚形成Pieloram、Dicamb等都可以诱导体细胞胚的形成。 ABA 的影响 ABA 对植物体体细胞胚的发生于发育具有重要作用，ABA对胚性愈伤组织的诱导有促进作用。 乙烯抑制体细胞胚的发生。 4. 其他的添加物 多胺类物质与体细胞胚的形成密切相关。适宜浓度的金属离子Co2+ 、Mn2+、 Cu2+ 对体细胞胚的诱导有促进作用。其机理可能是抑制乙烯形成酶的活性，抑制乙烯的的合成和促进多胺的合成。水解乳蛋白中的还原性氮对胚状体或不定芽的分化有促进作用。适量的加入活性炭能够提高体胚发生率。 5. 培养方式以及条件 影响体胚诱导的培养方式主要有液体培养、固体培养、薄层切片培养，而培养条件主要是指光照条件、pH、温度等。百合体细胞胚诱导一般在暗中进行。 光质的影响 分别用红光 蓝光 广谱光 白光等 分别诱导胚性愈伤组织和体细胞胚 取诱导十天的绿白色脆弱的愈伤组织一克从含有2，4-D的半固态培养基上，加入到含有2,4-D和激动素的20ml液体培养基的锥形瓶中培养，放置在回旋振动器上，光周期16小时，温度25 每五天更换10ml新鲜培养基，作为在此培养。培养物用125uM的不锈钢滤网进行过滤，分离出单细胞和小细胞团。加入不同浓度的生长素，和过滤得到的培养物，在细胞悬浮培养期间用显微镜观察和统计细胞生长率。细胞生长率用PCV衡量，刻度离心管离心。 基因类型 基因 表达时期 产物 相关功能 管家基因 Top-1 EF-1a CEM-1 H3-1 CGS102 CGS201 鱼雷形胚 球形胚 球形胚或之前 体细胞胚 体细胞胚早期 体细胞胚早期 拓扑异构酶 延伸因子-1a 甘氨酸富集蛋白 组蛋白 谷氨酰胺合成酶 原维管束细胞增殖 促进细胞分裂 促进细胞壁形成 促进细胞分裂 促进氮代谢 信号转导 基因 SERK SwCDK CRK MsCPK 胚感受态细胞 球形胚 体细胞胚 体细胞胚早期 体细胞胚发生的受体激酶 钙依赖的蛋白激酶 钙依赖的蛋白激酶 类钙调素蛋白激酶 确定体细胞胚发生 钙信号转导 钙信号转导 钙信号转导 生长素诱导基因 DcArg-1 pjCW1 pjCW2 胚性细胞诱导期 短期胚性培养物 短期胚性培养物 脱落酸诱导基因 DcECP63 DcECP40 DcECP31 鱼雷形胚 鱼雷形胚 鱼雷形胚 胚胎发生后期富集蛋白 同源异型 基因 Soh 1 CHB 1-CHB 6 DcDB 1 心形至鱼雷形胚 球形和鱼雷形胚 球形和鱼雷形胚 转录因子 染色质结合蛋白 维管束形成 胞外分泌 基因 EP 3-1 EP 3-2 EP 2 DcAGP 1 胚性细胞 胚性细胞 胚性细胞 胚性细胞 几丁质酶 脂转移蛋白 阿拉伯版半乳聚糖蛋白 看护作用 表皮形成 细胞增殖、膨大和体细胞胚发育 胚成熟基因 Mat 1 Dc 2.15 Dc 3 Dc 8 DcEMB 1 Em DcECP 31 DcECP 40 MsLEC 1 MsLEC 2 胚发育后期 心形和鱼雷形 胚发育后期 胚发育后期 胚发育后期 胚发育后期 胚发育后期 胚发育后期 胚发育后期 胚发育后期 胚胎发生后期富集蛋白 凝集素 胚干燥 促进胚成熟 胚成熟 植物体细胞胚胎发生是一个复杂的发育过程, 研究者们通过分析植物体细胞胚发生过程中的基因表达或胚性组 织和非胚性组织中基因的差异表达, 获得了在体细胞胚发生过程不同时期表达的基因, 并分析了这些基因在胚胎发生途径 中可能的作用。综