实验一培养基优化-副本资料.ppt

实验一 微生物培养基优化 优化培养基的目的和方法 成分最佳配比 从生化反应的基本原理来推断和计算？ 经验 配方实验 培养基成分选择的原则 菌种的同化能力 代谢的阻遏与诱导 合适的C、N和比 pH的要求 大分子原料应首先考虑是否具有相应的水解酶。 快速利用的碳(氮)源和慢速利用的碳(氮)源的相互配合 C源：碳架，能源N源；C/N=100:(0.2-2.0) 培养基设计过程 根据前人的经验，初步确定可能的培养基成分; 通过单因子实验最终确定出最适宜的培养基成分; 当培养基成分确定后,剩下的问题就是各成分最适的浓度,由于培养基成分很多,为减少实验次数常采用一些合理的实验设计方法。 正交实验设计 根据问题的要求和客观的条件确定因子和水平，列出因子水平表; 根据因子和水平数选用合适的正交表，设计正交表头，并安排实验; 根据正交表给出的实验方案，进行实验; 对实验结果进行分析，选出较优的实验条件以及对结果有显著影响因子。 一、实验目的 掌握微生物斜面培养基、种子培养基及发酵培养基确定方法，学会对已确定菌种确定实验室发酵工艺。 二、实验原理 生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。由于细菌、酵母等单细胞生物在液体深层通气发酵过程中是以均一混浊液的状态存在的，所以可以采用直接比色法进行测定。 三、仪器与试剂 全恒温振荡培养箱，分光光度计、电热恒温水浴槽、天平、电炉。 试剂为葡萄糖、胰蛋白胨、 酵母浸粉、NaCl。 四、实验方法 （1）培养基的配制 表1 正交表试验设计 因素水平 葡萄糖％ 胰蛋白胨％ 酵母浸粉％ NaCl% 1 5 2 1 2 2 3 1.5 0.75 1.5 3 1.5 1 0.5 1 4 1 0.5 0.25 0.5 表2 正交表实验方案 编号 葡萄糖 胰蛋白胨 酵母浸粉 NaCl 生物量（OD） (A) (B) (C) (D) 0h 2h 3h 4h 5h 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 1 4 4 4 5 2 1 2 3 6 2 2 1 4 7 2 3 4 1 8 2 4 3 2 9 3 1 3 2 10 3 2 4 3 11 3 3 1 4 12 3 4 2 1 13 4 1 4 2 14 4 2 3 1 15 4 3 2 4 16 4 4 1 3 (2) 将上述培养基配制好以后，每支支试管装入培养基 3ml，于 121℃下灭菌 25 min，冷却。 (3) 冷却后接种(接种量为 5%)，置于 37 ℃ 培养箱进行培养。 (4) 测OD 值：将接种0 h、 2 h、3 h、4 h、5 h不同时间的菌悬液摇均匀后于600 nm 波长、1cm 比色皿中测定 OD 值。比色测定时，用未接种的培养基作空白对照，并将 OD 值填入表中，最终确定最佳培养基的组成及发酵时间。 五、思考题 (1) 比浊计数在生产实践中有何应用价值？ (2) 本实验为什么采 600 nm 波长测定大肠杆菌菌悬液的光密度？如果你在实验中需要测定酵母菌生长的 OD 值，你将如何选择波长？ 2.1 试验方案设计 实例：为提高山楂原料的利用率，研究酶法液化工艺制造山楂原汁，拟通过正交试验来寻找酶法液化的最佳工艺条件。 试验设计前必须明确试验目的，即本次试验要解决什么问题。试验目的确定后，对试验结果如何衡量，即需要确定出试验指标。试验指标可为定量指标，如强度、硬度、产量、出品率、成本等；也可为定性指标如颜色、口感、光泽等。一般为了便于试验结果的分析，定性指标可按相关的标准打分或模糊数学处理进行数量化，将定性指标定量化。 （1） 明确试验目的，确定试验指标 对本试验而言，试验目的是为了提高山楂原料的利用率。所以可以以液化率{液化率=[(果肉重量-液化后残渣重量)/果肉重量]×100%}为试验指标，来评价液化工艺条件的好坏。液化率越高，山楂原料利用率就越高。 下一张 主 页 退 出 上一张 根据专业知识、以往的研究结论和经验，从影响试验指标的诸多因素中，通过因果分析筛选出需要考察的试验因素。一般确定试验因素时，应以对试验指标影响大的因素、尚未考察过的因素、尚未完全掌握其规律的因素为先。试验因素选定后，根据所掌握的信息资料和相关知识，确定每个因素的水平，一般以2-4个水平为宜。对主要考察的试验因素，可以多取水平，但不宜过多（≤6），否则试验次数骤增。因素的水平间距，应根据专业知识和已有的资料，尽可能把水平值取在理想区域。 （2） 选因素、定水平，列因素水平表 对本试验分析，影响山楂液化率的因素很多，如山楂品种、山楂果肉的破碎度、果肉加水量、原料pH 值、果胶酶种类、加酶量、酶解温度、酶解时间等