圆二色谱研究As44在稳定肌红蛋白结构中的作用.docVIP

圆二色谱研究Asp44在稳定肌红蛋白结构中的作用.txt如果中了一千万，我就去买30套房子租给别人，每天都去收一次房租。哇咔咔~~充实骑白马的不一定是王子，可能是唐僧；带翅膀的也不一定是天使，有时候是鸟人。 本文由lywbetty贡献 pdf文档可能在WAP端浏览体验不佳。建议您优先选择TXT，或下载源文件到本机查看。 第 2 8 卷 , 第 2 期 　 　　　　　　　　　　　 光 谱 学 与 光 谱 分 析 2 0 0 8 年 2 月 　　　　　　　　　　　 　Spect ro scopy and Spect ral Analysis 圆二色谱研究 Asp44 在稳定肌红蛋白结构中的作用 王静云1 , 刘 　 1 , 唐 　 1 , 2 , 包永明1 , 郑学仿2 , 安利佳1 丹 乾 11 大连理工大学环境生命学院 , 辽宁 大连 　 116024 　　　　　　　　 21 辽宁省高校生物有机重点实验室 , 大连大学 , 辽宁 大连 　 116622 引　 言 蛋白结构的稳定及正确的折叠是它们执行各种生物功能 二硫键 、 盐键 、 氢键及内在二级结构的倾向性对蛋白结构的 稳定至关重要 [ 1 ,2 ] 。 长期以来人们认为蛋白表面的氨基酸残 基暴露在溶剂中 , 对蛋白的稳定性影响甚微 。 但最近几年研 究成果对这一观念提出了质疑 , 发现蛋白表面带电氨基酸残 基对蛋白的稳定性及性质具有非常大的影响 , 从而开辟了通 过优化蛋白表面电荷与电荷的作用来调节蛋白结构稳定性及 功能的新思路 [ 325 ] 。 肌红蛋白 ( Mb) 是由一条含有 153 个氨基酸残基的多肽 链和辅基血红素组成的 。 在生物体中担负着重要的储存氧和 促进氧在细胞中扩散的生理功能 [6 ] 。 尽管有关氨基酸残基对 肌红蛋白稳定性及性质的影响已有很多报道 , 但大都集中在 研究抹香鲸肌红蛋白血红素周围氨基酸或疏水氨基酸的作 用 [729 ] 。 作者前期的研究 [ 10 ] 发现当将马心肌红蛋白表面 44 位 氨基酸从天冬氨酸突变为赖氨酸后 , 突变肌红蛋白与细胞色 素 b5 之间的电子转移速率提高了一个数量级 , 但这一蛋白 表面氨基酸对马心肌红蛋白结构稳定性的作用未见报道 。 各 种光谱学的方法是研究蛋白结构 、 功能的重要手段 [11214 ] , 由 于圆二色谱法可以研究在不同条件下蛋白二级结构折叠状态 　 收稿日期 : 2006211218 , 修订日期 : 2007202226 的基础 。 大量的实验结果及理论计算表明 : 疏水核的堆积 、 基金项目 : 国家自然科学基金项目 和教育部留学归国人员启动基金项目资助 作者简介 : 王静云 , 女 , 1967 年生 , 大连理工大学环境生命学院副教授 　　 2mail : wangjingyun @dl1 cn e 摘　 　 要 为了了解肌红蛋白 Mb 分子表面 44 位天冬氨酸对稳定肌红蛋白结构的影响 , 用 PCR 定点突变的技 术将肌红蛋白 (Mb) 基因上的第 44 位天冬氨酸的密码子 GA T 突变成赖氨酸的密码子 AAA , 获得突变体 D44 K 基因 , 将突变体基因克隆在肌红蛋白表达质粒 p GYM 上 , 转化大肠杆菌 BL21 , 突变蛋白 D44 K 在大 肠杆菌中大量表达 , 收集菌体 。 酶法裂解细菌 , 依次用硫酸铵沉淀 、 离子交换柱层析 、 凝胶柱层析分离纯化 得突变肌红蛋白 D44 K。 用圆二色谱分别研究野生型肌红蛋白及其突变体 ( D44 K) 的耐热及耐酸的变性过程 。 实验结果表明 : 用碱性氨基酸 L ys 取代酸性氨基酸 Asp44 残基 , 增强了肌红蛋白耐热变性能力 , 导致蛋白质 的热变性中点温度 Tm 由 711 9 ℃ 增加到 751 1 ℃, 但对肌红蛋白耐酸变性的能力影响不大 。 关键词 　 肌红蛋白 ; 定点突变 ; 圆二色谱 ; 蛋白质结构 ; 结构稳定性 中图分类号 : Q5181 4 　　 文献标识码 : A 　　　 文章编号 : 100020593 (2008) 0220426204 的变化 [ 15217 ] , 因此为了进一步探讨蛋白表面氨基酸在蛋白质 结构稳定性中发挥的作用 , 本文用圆二色光谱初步探讨马心 肌红蛋白突变体 D44 K 的蛋白结构稳定性 。 1　 实验部分 DNA 连接酶 、 DNA 聚合酶 、 I 和 Bam H I 限制性内切酶等 Pst 购自大连宝生物公司 。 含有编码野生型马心肌红蛋白基因的 表达质粒 p GYM , 由 美 国 Nort hwest