溶液吸附法测定细菌比表面积.doc

溶液吸附法测定细菌比表面积 实验利用亚甲基蓝染料水溶液吸附法测定微生物的比表面，因为亚甲基蓝在所知的染料中具有最大的吸附倾向，可被大多数固体物质所吸附，在一定的条件下为单分子层吸附，即符合朗格谬尔吸附等温式。 根据单分子层次吸附理论，当吸附达到饱和时，吸附质分子铺满整个吸附表面而不留空位，此时1克吸附剂吸附吸附质分子所占的表面积，等于所吸附吸附质的分子数与每个分子在表面层所占面积的乘积。 即： 式中： S：比表面cm2/g A：亚甲基蓝分子平均截面积81.3×10-16cm2（亚甲基蓝的平面吸附投影面积为135×10-20m2侧面吸附投影面积为75×10-20m2端基吸附投影面积为39×10-20m2。微生物吸附方式不知，所以取平均值计算） M：亚甲基蓝的摩尔质量373.9 NA：阿佛加德罗常数 W：微生物的湿重（克） ΔW：微生物饱和吸附时亚甲基蓝的重量（克） （ 式中： C0：吸附前溶液的浓度（g/L） C：吸附达单层饱和后溶液浓度（g/L） V：溶液的体积（L）） 实验步骤： 1、工作波长的选择： 亚甲基蓝溶液在可见区有二个吸收峰445nm和665nm。但在445nm处活性炭吸附对吸收峰有很大的干扰固本实验选用的工作波长为665nm。因为个实验仪器不同数值有浮动，所用某一待用标准溶液，以蒸馏水为空白液，在 650nm～680nm 范围内测量吸光度，以最大吸收时的波长作为工作波长。 2、标准工作曲线绘制 A．分取浓度为0.5g/L的亚甲基蓝贮备液1、2、3、4、5、6ml于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得不同浓度的标准液，在分光光度计上测定吸光度，最大波长处测吸光值 以标准液（系列）浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准工作曲线 3、比表面的测定 1）配制亚甲基蓝浓度为0.05g/L溶液 准确分配浓度为0.5g/L亚甲基蓝贮备液10ml加到100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀 。 2）移液50ml置250ml摇瓶中，再加入准确称量的0.05g湿重细菌，摇床180rpm摇晃3小时，吸取该液25ml于另一个100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，在分光光度计上测其吸光度，然后从标准曲线中查出对称浓度C′。 PS:亚甲基蓝法以前周珊学姐做的步骤我看了，和杨彦平讨论了觉得学姐的写的有问题，参考了学姐的方法，看了看文献，做出了调整得出。 PPS:网络上说可以用显微镜目测细菌直径估算细菌比表面积的方法不知可不可用。 吸光度 30 25 20 15 10 5 标准液浓度 （×mg/L） （×10-3mg/ml） 6.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 分取亚甲基蓝贮备液 （0.5g/L）