实验指导-《分子物学大(综合)实验》 2.docVIP

《分子生物学大（综合）实验》实验指导 不同生长期仿刺参性腺组织中基因差异性表达的研究 幼参的性腺颜色一般为灰褐色，而成熟期，雌性生殖腺为橘红色，雄性为乳白色或浅乳黄色。 一、TRIZOL试剂盒提取RNA 取新鲜健康的体长为3-5 cm 的幼参与12-15 cm 的成熟参，用无菌海水清洗其体表，置于无菌大培养皿上。解剖刺参，取出其性腺。以幼参的性腺提取物为对照组，成熟刺参的性腺提取物为试验组。 1 匀浆 每50~100mg组织，加1ml的TRIZOL。将样品放在干净已灭菌的研钵中，倒入液氮，迅速研磨样品，在研钵中直接加入TRIZOL。样品的体积不要超过TRIZOL试剂体积的10%。再用Tip头吸到EP管中。 2 离心 匀浆后，2~8℃，12 000r/min，离心10 min。取上清，去沉淀。若上清顶层有一层脂肪，应去除。将上清液移到干净的EP管中，添加氯仿，相分离。 3分离 上清液在15~30℃下温育5 min，彻底去除核蛋白复合物。每1ml的TRIZOL试剂加0.2ml的氯仿，盖紧EP管盖。用手剧烈震荡15sec，15~30℃下温育2~3 min。2~8℃下，不超过12 000r/min, 离心15 min。离心后，复合物分离出从下到上依次为：一较低的红色区、酚氯仿相、一个分界面和无色上清水相。RNA保留在无色上清水相中，水相体积大约是用于匀浆的TRIZOL试剂体