产柠檬酸黑曲霉的筛选.docVIP

产柠檬酸黑曲霉的筛选 水平 因素 蔗糖（%） NH4NO3（%） KH2PO4 （%） MgSO4·7H2O （%） A B C D 1 10 0.1 0.05 0.1 2 15 0.2 0.1 0.25 3 20 0.3 0.2 0.5 表3 正交试验L9 34 表 实验号 列号 A（蔗糖） 一因素 B（ NH4NO3 ） 二因素 C（ KH2PO4 ） 三因素 D（MgSO4·7H2O ） 四因素 产酸量 g/100ml） 1 1（10%） 1（0.1%） 1（0.05%） 1（0.1%） X1 , X1 2 1 （10%） 2（0.2%） 2 （0.1%） 2（0.25%） X2 , X2 3 1 （10%） 3（0.3%） 3 （0.2%） 3（0.5%） X3 , X3 4 2 （15%） 1（0.1%） 2 （0.1%） 3 （0.5%） X4 , X4 5 2 （15%） 2 （0.2%） 3 （0.2%） 1 （0.1%） X5 , X5 6 2 （15%） 3 （0.3%） 1 （0.05%） 2 （0.25%） X6 , X6 7 3 （20%） 1（0.1%） 3 （0.2%） 2 （0.25%） X7 , X7 8 3 （20%） 2 （0.2%） 1 （0.05%） 3 （0.5%） X8 , X8 9 3 （20%） 3 （0.3%） 2 （0.1%） 1 （0.1%） X9, X9 把每一个因子取各水平的三次实验结果取平均值，即k1 20.0+35.0+25.0 /3 27.0 ， 同 理 可 以 得 出 各 水 平 的k1,k2,k3;各水平的极差 Rj就可以根据最大的 k 值与最小的 k值之差获得。极差R越大，说明该因子的水平变动时，实验结果变化越大，从而可按极差大小来决定因子主次顺序。此外，K1,K2,K3值的大小反映了各水平对实验结果的影响，因而最大的 K 值对应了最好的水平。正交试验结果见表4。 表4 正交实验结果 试验号 A（蔗糖） B（ NH4NO3 ） C（ KH2PO4 ） D MgSO4·7H2O ） 产酸量 （g/100ml） 1 1 1 1 1 0.23 2 1 2 2 2 0.23 3 1 3 3 3 0.36 4 2 1 2 3 0.19 5 2 2 3 1 0.32 6 2 3 1 2 0.20 7 3 1 3 2 0.27 8 3 2 1 3 0.12 9 3 3 2 1 0.23 K1 0.27 0.23 0.18 0.26 K2 0.24 0.19 0.22 0.23 K3 0.21 0.26 0.32 0.22 优水平 A1 B3 C3 D1 Rj 0.06 0.07 0.14 0.04 主次顺序 C B A D 本实验采用极差分析也称直观分析法分析正交试验结果。优点是直观,简单,其使用范围也比较广,因此它是正交实验中最常用和最有力的工具。但它的缺点是分析结果比较粗糙,往往不能从理论上给予确切的说明,特别是第一类判别因子的主次问题,当实验结果存在有混杂现象时,往往会得出错误的结论。另外还可用方差分析法。方差分析法是实验设计中传统的方法,其优点是通过统计分析的方法排除实验误差的干扰,得出比较科学的实验结论。但方差分析由于计算复杂,所以在多因子实验中主要用于判别因子的主次或者判别因子作用的显著性这个问题。 采用直观分析法对结果进行极差分析，比较三因素的 R值，由表4可以计算并判断 A,B,C,D 4个因素的优水平组合，即蔗糖10% ， NH4NO3 0.3% ，KH2PO44 0.2%， MgSO4·7H2O 0.1%。比较各因素的 Rj值可见C B A D 。因素对试验指标影响的主次顺序是 KH2PO4＞NH4NO3＞蔗糖＞MgSO4·7H2O,即 KH2PO4对发酵的影响最大；其次是NH4NO3，蔗糖；而MgSO4·7H2O的影响相对较小。 2.4 紫外照射诱变育种，见表5. 表5 诱变育种变色圈法结果 诱变时间 变色圈大小/菌落大小 45s 2 60s 2.17 75s 2 90s 1.9 105s 1.83 120s 3 135s 2.3 150s 2.17 165s 1.67 取变色圈比值较大的前五个，即诱变120s,135s,150s,75s,45s的平板进行摇瓶培养。5天后产生菌体球和柠檬酸，液体颜色较浅。 诱变150s的菌种用0.1429 mol/L的滴定10 ml的发酵液，消耗NaOH溶液量为0.09 g/100ml，比原黑曲霉的产酸能力有所下降，即发生负突变。