第12 章 核 酸三版(2013-11-14))A.ppt

1985年：美国能源部 Department of Energy，DOE 在加州大学圣克鲁滋会议上第一次对人类基因组全部测序进行可行性论证,形成“人类基因组计划”草案 1986年： 著名的诺贝尔奖获得者Dulbecco在Science上发表文章，高瞻远瞩地率先向世界公开提出人类基因组计划，并倡导全世界有能力的科学家共同完成这一国际性大课题。 1990年：NRC（美国国家科学研究委员会）和DOE宣布这年的10月1日为人类基因组计划正式启动时间。 人类基因组计划开辟了生命科学新纪元 人类基因组计划开辟了生命科学新纪元 人类基因组计划开辟了生命科学新纪元 1953年，Watson和Crick根据Chargaff 规律和DNA Na盐纤维的X光衍射分析提出了DNA的双螺旋结构模型。 二级结构的含义：两条单链DNA通过碱基互补配对 的原则形成的双螺旋结构。 三种环形DNA的拓扑学特性 ③ 超螺旋数 W （或拧数）： 是指双螺旋形成超螺旋的周数，可不是整数。 L T ＋ W 互绕数α β 23， τ 0 互绕数 α 23 β 25， τ -2 互 互绕数α β 23， τ 0 互绕数α β 25， τ 0 互绕数L 不断链不变 双螺旋数T 要恢复定值 +超螺旋数W 染色体中的DNA 540 bp L 540:10 54 100 bp L 540-100 :10 44 ① 互绕数 L ：44 螺旋圈数 T：44 超螺旋数 τ: 0 L T+W （或W L-T） ① 互绕数 L ：54 螺旋圈数 T：54 超螺旋数 τ: 0 互绕数L 不断链不变 双螺旋数T 要恢复定值 +超螺旋数W 超螺旋（w） L - T 正数→正超螺旋 负数→负超螺旋 超螺旋的类别 L T ＋ W 正超螺旋：在一端使绳子向缠紧的方向旋转 右旋），再将绳子两端连接起来，会产生一个左旋的超螺旋，以解除外加的旋转造成的胁变（由DNA双螺旋过度缠绕引起）。 负超螺旋：在绳子一端向松弛方向旋转（左旋），再将绳子两端连接起来，会产生一个右旋的超螺旋，以解除外加的旋转所造成的胁变（由DNA双螺旋缠绕不足引起）。 超螺旋密度 ④比连环差 λ （specific linking difference）：表示DNA的超螺旋程度 Superhelix density λ （L-L0）/L0 超螺旋密度 一般天然DNA分子中σ - 0.05 - 5%负超螺旋 负超螺旋DNA是由于两条链的缠绕不足引起，很易解链，易于参加DNA的复制、重组和转录等，这也许就是为什么在生物内DNA总是采取负超螺旋形式的主要原因。 什么方法才可以改变互绕数 ？ 互绕数L 1 互绕数L 6 L T＋W 拓扑异构酶（topoisomerase）: 定义：通过切断DNA的一条或两条链中的磷酸二酯键，然后重新缠绕和封口来改变DNA连环数的酶。 ① 拓扑异构酶酶I（解旋酶） 能使双链负超螺旋DNA转变成松驰形环状DNA，每次催化使L值增加1。 ② 拓扑异构酶酶II（促旋酶） 能使松驰环状DNA转变成负超螺旋形DNA，每次催化使L减少2。 拓扑异构酶 Strand Passage Model for Topo I Type I Topoisomerases change Ln by 1, breaks 1 strand. Model for Topo II Mechanism Q: How Does Eukaryotic DNA Become Negatively Supecoiled? A: DNA wrapping around histone cores leads to net negative supercoils! DNA超螺旋的生物学意义 1. 超螺旋形式是DNA分子复制和转录的需要； 生物体内DNA结构是处于动态之中。超螺旋的引入就提高了DNA的能量水平，而超螺旋程度的改变介导了DNA结构的变化。即超螺旋多余的能量可能使DNA双股链分开，或局部熔解。这种结构上的变化对DNA分子复制和转录等的启动很重要。 2. 超螺旋可使DNA分子形成高度致密的状态从而得以容纳于有限的空间。 3. 增加了DNA的稳定性 （1）连环数（L） 是指DNA的一条链按照右手的方向环绕螺旋轴（螺旋轴被限制在同一个平面上）一条链的次数。 对于一个共价闭环DNA来说，其L值是不变的。如一个5 400bp大小的松弛型B型共价闭环DNA，其L值应该是5 400/10＝540。 （2）扭转数（T） 是指DNA两条链相互缠绕的次数，即Watson-Crick螺旋数。对于一个倾向形成B型双螺旋的DNA来