斜纹夜蛾核型多角病毒ⅡORF146基因的克隆与表达.docVIP

斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF146基因的 克隆、表达与启动子活性分析 盛晔1，闵丹，2，张志芳2，朱 江1 摘要: 【目的】研究斜纹夜蛾核型多角体病毒II ORF1的结构与功能。【方法】根据SpltMNPV II ORF1基因序列设计引物经PCR扩增克隆ORF1基因。在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析。构建ORF1片段的原核表达载体表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体。【结果】核苷酸序列分析表明，读码框含 bp，编码个氨基酸的蛋白质，推定分子量为.4 kD。在病毒感染以后pET-28a-ORF13原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高，效价可达13200以上。【结论】SpltMNPV II ORF1是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白。推测ORF146基因可能与SpltMNPV II病毒感染宿主细胞后病毒DNA复制有关。制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能。 关键词: 斜纹夜蛾； 核型多角体病毒；ORF基因；原核表达 中图分类号: Q933　　 文献标识码:A 文章编号:0001（6209） 斜纹夜蛾 Spodoptera litura，Spli 又名莲纹夜蛾俗称夜盗虫[1]属鳞翅目夜蛾科一种杂食性重要农业和林业害虫危害植物共计109科389种[2,3]。由于斜纹夜蛾的食性杂、世代重叠、抗性强因此防治难度高在各种化学合成杀