第6章 酶工程.ppt

第六章 酶工程 (1)对生物宝库中存在天然酶的开发和生产； (2)自然酶的分离纯化及鉴定技术； (3)酶的固定化技术(酶和细胞固定化) ； (4)酶反应器的研制和应用； (5)与其他生物技术领域的交叉和渗透。 其中固定化酶技术是酶工程的核心。实际上有了酶的固定化技术，酶在工业生产中的利用价值才真正得以体现。? 1、氧化还原酶(oxidoreductase) 2、转移酶( transferase ) 3、水解酶( hydrolase ) 4、裂解酶(或裂合酶lyase ) 5、异构酶( isomerase ) 6、合成酶( synthease )或连接酶( ligase ) 7、核酸酶(催化核酸) 酶用于生物催化的概况 尽管人类19世纪前后才建立起酶的概念，但酶的催化作用却很早就为人们的生活所利用。比如： (1)在人类游牧生活时期，就已会利用动物的胃液来凝固牛乳 ； (2)人类在4000多年前就已掌握的酿酒和制酱技术其实也是酶作用的结果。 放线菌 1987年以后，Bucher发现酶的细胞外作用现象，从而导致了酶的商品化生产。 霉菌 最初的商品酶制剂主要以动植物为原料提取，如从牛胃中提取凝乳酶、从胰脏中提取胰酶、从血液中提取凝血酶、从植物材料中提取淀粉酶等。 之后，Takamine利用霉菌来生产淀粉酶使得酶制剂工业取得突破，其方法至今仍被采用。 (一) 样品的采集 采样的目的、采样地点、采样方法及采样的数量。 (二) 菌种的分离 培养基的确定、培养条件的确定。 (三) 菌种的初筛 (1)用简单的定性反应进行初筛； (2)在最初分离阶段就给予特殊的培养基或培养条件，进而让目的菌株得以繁殖，尽可能地把只成为目的菌的菌株或只将其最适菌株的一株纯化分离。 (四) 菌种的复筛 初筛之后，还要进行复筛。复筛的目的是在初筛的基础上，筛选产酶量高、性能更符合生产要求的菌种。 酶活的测定方法的建立尤其重要。 (五) 对复筛获得菌株的要求 (1)不是致病菌； (2)菌株不易变易和退化； (3)不易感染噬菌体； (4)微生物产酶量高； (5)酶的性质符合应用的需要，而且最好是胞外酶； (6)产生的酶便于分离和提取，得率高； (7)微生物培养营养要求低。 (六) 最佳产酶条件的初步确定 (1)培养方式的确定； (2)最佳培养条件组合； (3)微生物产酶的特性(胞内酶、胞外酶)； (4)微生物酶收集的时间顺序； (七) 微生物产酶性能的进一步提高 (1)获得高产菌种的突变体(诱变育种)； (2)利用代谢工程和代谢调节机理来提高微生物的酶产量； (3)运用遗传工程、基因工程的手段将原有菌株中的目的基因转移到另外一些对生产环境更适应性的微生物细胞之内，使其高效表达。 (八) 微生物酶的提取 (1)酶的粗提； (2)酶的精制。 (九) 微生物产酶菌种的保藏 (1)斜面【短期：1～3个月】； (2)沙土管【适合放线菌或霉菌的孢子,保藏几年】； (3)冷冻【液氮超低温，－196度，保藏20年】。 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。即：在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团(物质)，特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构和性质。 提高酶的活力 activity； 增强酶的稳定性 stability； 降低或消除酶的抗原性 immunological property； 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 structure . 对酶分子进行修饰必须在修饰原理、修饰剂和反应条件的选择以及酶学性质等方面都要有足够的了解。 (1)酶的稳定性 热稳定性、酸碱稳定性、作用温度、pH、抑制剂等。 (2)酶活性中心的状况 活性中心基团、辅因子等。其他如分子大小、性状、亚基数等。 修饰反应尽可能在酶稳定条件下进行，并尽量不破坏酶活性功能的必需基团，使修饰率高，同时酶的活力回收高。 (1)pH与离子强度 pH决定了酶蛋白分子中反应基团的解离状态。由于它们的解离状态不同，反应性能也不同。 (2)修饰反应的温度与时间 严格控制温度和时间可以减少以至消除一些非专一性的修饰反应。 (