CLONTECH酵母双杂中文版【参考】.docVIP

目录 介绍 4 试剂盒物品清单 7 额外附加物品列表 9 酵母菌株 11 酵母载体 14 方法简述：单杂交文库的构建和筛选 16方法简述：双杂交文库的构建和筛选 17 构建用于酵母单杂交的报告质粒载体 18 构建用于酵母双杂交的DNA-BD融合载体 19 构建生成cDNA文库 21 构建和筛选酵母单杂交和双杂交文库（简述） 27 酵母单杂交文库的构建和筛选 28 酵母双杂交文库的构建和筛选 30方法A:通过酵母配对（Yeast Mating）来筛选目的蛋白 30方法B:通过共转化的方法筛选目的蛋白 35 分析阳性相互作用结果 38 问题解决指南 44 参考文献 47 相关产品 50 附录A: 双链 cDNA合成的典型结果 51 附录B: 酵母感受态的制备—LiAc 法 52 附录C： 单杂交对照载体信息 53 附录D： 双杂对照载体信息 54 表格列表 Table I． BD Matchmaker酵母菌株的基因型 11 Table II． BD Matchmaker酵母菌株的表型 11 Table III．单杂交系统的载体 14 Table IV． 双杂交系统的载体 15 Table V． 各BD-Matchmaker DNA-BD 载体的比较 19 Table VI． RNA起始浓度和PCR扩增循环数之间的关系 24 Table VII．单杂交共转化的对照实验的设置 29 Table VIII．单杂共转化对照实验：期望的结果 29 Table IX． 双杂交转化的对照实验的设置 33 Table X． 双杂交配对筛选的对照实验的设置 Table XI． 双杂交共转化的对照实验的设置 Table XII． 双杂交共转化的对照实验：期望的结果 Table XIII． 用于PCR筛选菌落的Assembling Master Mixs 图片列表 Figure 1．使用BD Matchmaker单杂交系统筛选蛋白-DNA相互作用 4 Figure 2．使用BD Matchmaker单杂交系统筛选蛋白-蛋白相互作用 4 Figure 3．酵母单杂交和双杂交筛选的大致步骤 5 Figure 4．构建和筛选BD Matchmaker酵母单杂交和双杂交文库 6 Figure 5．酵母菌株AH109和Y187中的报告基因 12 Figure 6．BD Matchmaker酵母单杂交文库的构建和筛选 16 Figure 7．BD Matchmaker酵母双杂交文库的构建和筛选 17 Figure 8．用BD SMART技术合成高质量的ds cDNA 21 Figure 9．BD CHROMA SPIN纯化柱和收集管 26 Figure 10．通过酵母重整合作用来构建AD融合文库 27 Figure 11．为双杂交筛选AD融合文库 32 Figure 12．分析和证明可能的单杂交和双杂交相互作用阳性结果的策略 39 Figure 13．通过酵母配对来验证蛋白-蛋白相互作用 42 Figure 14．用对照用人胎盘Poly A+ RNA合成双链cDNA 51 Figure 15．p53HIS对照载体的图谱 53 Figure 16．pGAD-Rec2-53 AD对照载体的图谱 53 Figure 17．pGADT7-RecT AD对照载体的图谱 54 Figure 18．pGBKT7-53 DNA-BD 对照载体图谱 54 Figure 19．pGBKT7-Lam DNA-BD 对照载体图谱 55 （一） 介绍 BD MatchmakerTM Library Construction Screening试剂盒提供一种简便的方法构建cDNA文库用来进行酵母双杂交和单杂交的筛选，这些试剂盒结合了BD Matchmaker TM Systems和BD SMART TM cDNA Synthesis的技术，只需要用任何组织的1 μg poly A+ RNA 或total RNA就能构建cDNA文库。 通过一般细胞内克隆步骤，你能利用BD Matchmaker Systems所提供的灵敏的转录方法所构建的文库来进行单杂交或双杂交实验。 单杂交实验的原理——蛋白-DNA相互作用实验 单杂交实验使你能够确定和描述蛋白与目的顺式DNA激活序列的绑定，该序列可能是处于最小限度的启动子上游的用于增强转录的元件。这个实验也可以用于预测或新蛋白的DNA绑定结构域的确定。通过BD Matchmaker One-Hybrid System你可以很容易的获得这些基因表达的蛋白 在BD Matchmaker One-Hybrid实验中，潜在的DNA绑定蛋白基因是与克隆在pGADT7-Rec2（为单杂交设计的低拷贝载体）上GAL4激活结构域