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生物制品学备课 第十九章 基因治疗与核酸药物 1、基因治疗的概念 基因治疗（gene therapy）有广义和狭义之分。狭义的基因治疗即通常所说的基因治疗，是指通过基因转移技术将外源正常基因直接导入患者病变部位的靶细胞，通过控制目的基因的表达，抑制、校正、替代或补偿缺陷或异常基因，从而恢复受体细胞、组织或器官的正常生理功能，进而达到治疗疾病的目的。广义的基因治疗包括狭义的基因治疗和利用核酸药物进行的治疗。 2、基因治疗的发展 1963年，J.Lederberg 对未来医学的发展进行评论：“分子生物学的应用将会成为对人类染色体核酸序列的直接控制，以及对目的基因的识别、选择和整合。” 1977年Wigler和他的同事将纯化的疱疹病毒胸苷激酶（thymidine kinase，TK）基因导入TK基因敲除的小鼠，首次成功实现了将基因转入哺乳动物细胞以纠正遗传缺陷的目的。 1989年Rosenberg 与合作者对黑色素瘤患者实施了第一例基因治疗的临床试验。 20世纪90年代初，被誉为“基因治疗之父”的F.Anderson及其研究小组对两名患有腺苷脱氨基酶（adenoine deaminase，ADA）重症联合免疫缺陷的儿童进行临床试验，采用反转录病毒载体携带正常腺苷脱氨酶基因进行免疫治疗，获得了基因治疗的首次成功。 2000年Fischer和他的同事应用反转录病毒载体系统进行基因治疗，成功治愈了患有重症联合免疫缺陷（SCID）的患者。 3、基因治疗的方式 两种方法：体内（in vivo）法和体外（ex vivo）法。 体内疗法是将含有目的基因的载体或裸DNA直接导入患者体内有关的器官组织和细胞内，已达到治疗的目的。 优：简单易行 缺点：基因转染率低，疗效短 目前，研究和应用较多的是体外疗法，即将有基因缺陷的细胞取出，在体外将外源目的基因导入靶细胞，然后将经转染的靶细胞输入患者体内，使带有外源基因的靶细胞在体内表达治疗产物。 4、基因治疗的策略 （1）基因置换（gene replacement）是将特定的目的基因导入特定的细胞，通过定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。该方法只对缺陷基因部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变。 （2）基因添加 基因添加或称基因增补（gene augmentation）是在有缺陷的细胞中导入相应的正常基因，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不能表达的产物。 （3）基因失活 基因失活（gene inactivation）是指运用反义技术（antisense technology），将反义寡核苷酸或反义RNA导入细胞以封闭某些有害基因的表达，即人们通常意义上说的反义疗法。 （4）自杀基因治疗 将自杀基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生自杀效应，从而到达清除肿瘤细胞的目的。 （自杀基因治疗不仅使转导了自杀基因的肿瘤细胞被药物杀死，而且其相邻的未转导自杀基因的肿瘤细胞也被杀死。） （5）免疫基因治疗 免疫基因治疗指向机体内导入能使机体产生抗病毒或抗肿瘤免疫能力的基因，以达到治疗目的。 （6）耐药基因治疗 耐药基因治疗是指为提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力，将产生抗药物毒性的基因导入人体细胞。 二、基因治疗的主要环节 1、获取特异性的外源基因 获取的目的基因应保留基因自身的编码区、调控区和特殊启动子等元件，以保持基因结构的完整性。 2、分离与体外培养靶细胞 合适的靶细胞是基因治疗成败的关键操作之一，选择时应考虑疾病的性质和部位、取材的容易程度、是否便于体外培养和遗传操作、是否有可行的转移方法等。 3、导入目的基因 化学方法：磷酸钙沉淀法、DEAE葡聚糖介导转染法、脂质体介导法等； 物理方法：电脉冲穿透法、显微注射法、基因枪法等； 生物学法：主要以病毒或质粒为载体进行基因转移，如反转录病毒（Rt）、腺病毒、疱疹病毒和腺相关病毒载体等，其中以反转录病毒为载体的基因转移的成功率最高。 4、目的基因的表达与调控 三、用于基因治疗的疾病 生物医学的研究表明，人类的各种疾病都直接或间接与基因有关，因此，可认为人类的一切疾病都是基因病。 人类的疾病可分为三大类： 一、单基因病，如腺苷脱氨酶（ADA）缺陷症，这类疾病只需一个基因缺陷即可发生； 二、多基因病，这类疾病的病因大多比较复杂，不但涉及各个基因，而且还往往与环境因素（包括自然环境、社会环境、生活方式等）有关，基因缺陷和疾病表型都具有明显的多样性，如I型糖尿病、肿瘤、心血管疾病等； 三、获得性基因病，此为病原微生物入侵所致，如艾滋病、乙型肝炎等。 目前基因治疗主要用于那些对人类健康威胁严重的疾病，如血友病、囊性纤维病、家族性高胆固醇血症、恶性肿瘤、心血管疾病、艾滋病等