电泳八年制(法)简析.pptVIP

原理： 蛋白质是两性电解质 蛋白质由于等电点的不同而带有不同的电荷性质。在电场下发生移动，当它们达到净电荷为零时停止迁移，分别聚焦在各自等电点相应的pH位置，这种行为称为聚焦反应。 蛋白质在等电聚焦电泳中的分离仅仅决定于其等电点，达到稳态后，如果它要正极或负极任何一侧扩散，均会受到相应的pH制约，迫使其扩散后退回原位。因此，蛋白质能在等电点位置被聚焦成一条稳定的窄带。 分辨率高，有浓缩效应。 等点聚焦特点 在等电聚焦电泳中，分离是在连续的pH梯度中进行的，用两性电解质建立电场中连续线性pH梯度。 只适用于两性解离的物质电泳 以聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel electrophorsis，简称PAGE)为电泳支持物,分辨率高 用于分离、鉴定蛋白质 pH梯度的形成 载体两性电解质定义：许多异构体与同系物的混合物，化学本质是多羧基多氨基脂肪族化合物，具有连续的PI值。 在没有电场时,载体两性电解质溶液的pH值大约是该溶液pH范围的平均值(如pH3-10的载体两性电解质溶液,其pH约为6.5左右)。所以载体两性电解质分子都带有电荷,只是在溶液中的正电荷和负电荷数目相等,净电荷为零. 引入电场时,载体两性电解质分子分别向阴极和阳极移动,最终在分子净电荷为零的位置停止迁移. pH梯度的形成 靠近阳极端的载体两性电解质,电负性最强,具有较强的缓冲氢离子的能力,使环