国科大生-生化生产工艺笔记精讲.docxVIP

一、工业微生物基础1.1常见工业微生物细菌：生化生产过程常见细菌：醋酸杆菌，乳酸杆菌、芽孢杆菌大肠杆菌，用于各种酶制剂、有机酸、氨基酸和肌苷酸等，同时细菌还常被用于基因工程，做载体的宿主细胞，构建基因工程菌生产外源物质。放线菌：在培养基表面菌落呈放射状而得名。介于细菌和真菌的单细胞微生物。多数腐生菌少数寄生菌。有发育良好的菌丝体但无横隔，单细胞菌丝，原核。土壤土腥味即使放线菌散发。菌落特征：干燥不透明，表面呈紧密细绒状，上面有一层色彩鲜艳的干粉；菌落和培养基紧密结合，难以挑取；菌落颜色的正反面常不一致，菌落边缘培养基的平面有变形的现象等。链霉菌属，小单孢菌属。霉菌：是一群在营养基质上形成绒毛状、蜘蛛网状或絮状菌丝体真菌的通常，并非微生物分类学上的名词。菌落特征与放线菌相近：形态较大，质地比放线菌疏松，外观干燥不透明，呈现或紧或松的绒毛状、蜘蛛网状或絮状，菌落和培养基紧密结合，难以挑取；菌落颜色的正反面常不一致。霉菌繁殖能力很强，能以无性孢子和油性孢子进行繁殖，多以无形孢子繁殖。曲霉属：黑曲，米曲，黄曲霉。青霉属、根霉属。酵母菌：单细胞真核微生物。形态多样，卵形为主，还有球形、椭圆形、柠檬形腊肠型及荷藕型。生长温度范围4-30℃，最适温度25-30℃。也不是微生物分类学的名词，以出芽方式进行无性繁殖的真核微生物总称。菌落特征与细菌相仿，但要较不透明，颜色单调，多呈乳白色或矿烛色，少数红，个别黑色。菌落发出悦人酒香味。噬菌体：凡用细菌和放线菌为生长菌株的发酵工业菌存在噬菌体危害问题，那么真菌存在吗,假丝酵母、酿酒酵母的培养是否会有噬菌体危害？木霉呢？1.2微生物菌种的分离菌种分离的步骤：采样：土壤，根据所需菌株确定采样地样品与预处理：物理、化学、生物增殖培养：给混合菌群提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件以促使所需菌株大量繁殖，从而有利于分离。纯种分离:平板划线法，稀释分离法，涂布分离法，毛细管分离法、小滴分离法等等。（最常用的平板划线法和稀释分离法的步骤与注意事项）性能测定：两步法，初筛和复筛。多次重复筛选直至获得1-3株较好的菌株，供发酵条件的摸索和生产试验。（筛选方法？）诱变育种1.3工业微生物菌种的改良微生物在长期进化中形成了一整套精密的代谢控制机制，一般不会过量代谢或生产超过自己生长、代谢所需要的酶或者代谢产物。打破其原有的代谢控制机制，进行目的产物的过量生产是菌种改良的主要问题。原生质体技术育种：包括原生质体诱变、原生质体转化或转染和原生质体融合等。体外DNA重组技术育种：基因工程。代谢工程育种：通过改变微生物的代谢流和代谢途径来提高发酵产品的产量、改善生产过程、扩展或构建新的代谢途径和产生新的代谢产物。1.4工业微生物的保藏保藏方法：斜面保藏法、穿刺保藏法、干燥保藏法、悬液保藏法、冷冻干燥保藏法（保藏机构主要保藏方法）、液氮保藏法、低温保藏法、石蜡油封保藏法、沙土管保藏法、菌丝速冻保藏法。（保藏的具体步骤方法）国内外一些保藏机构：ATCC（美国典型培养物收藏所）、CSHL（美国冷泉港实验室）、IAM（日本东京大学应用微生物研究所）、IFO（大阪发酵研究所）、KCC（日本科研化学有限公司）、NCTC（英国国立典型培养物收藏所）、NIH（美国国立卫生研究所）NRRL(美国农业部北方开发利用研究部)；中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCMS)下设6个微生物菌种保藏中心：普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC），农业微生物菌种保藏管理中心（ACC），工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC），抗生素菌种保藏管理中心（CACC），兽医微生物保藏管理中心（CVCC）。1.5工业微生物菌种的培养与扩大培养微生物的培养方法：表面培养固体培养液体深层培养菌种的扩大培养：从实验室制备到车间生产用菌种的过程。将保存在沙土管或冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过摇瓶及种子罐逐级扩大培养从而扩大培养，获得一定数量和质量的纯种。（P32）扩大流程：冷冻或沙土孢子接种到斜面活化摇瓶/茄子瓶/固体培养基培养/种子罐培养发酵罐。流程中的一些问题：斜面菌种不宜多次移接避免变异引起不纯，还要常进行分离纯化.（分离纯化的原理步骤，鉴于变异出来的，可能差别不大，难以分离）一级种子培养用摇瓶等，一些工厂不用，如谷氨酸工厂，而是培养大型斜面作为一级种子使用。二级种子培养用种子罐，大小根据需要发酵产品和大胶管的容积配套确定。种子罐级数：即制备种子需要逐级扩大培养的次数，根据种子的生长特性，孢子发芽及菌体繁殖速度以及发酵罐的容积定。生长快的菌种子用量少种子罐数量少，如谷氨酸生产。抗生素生产菌种生长慢。二级种子罐扩大培养，三级发酵。接种龄与接种量：接种龄是种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子