分子生物学实验-PCR-3-薛美兰.pptVIP

目 录 PCR的概念 PCR技术的创建 PCR的原理 PCR的反应体系和方法 PCR反应条件优化 PCR的类型和应用 PCR的基本原理 扩增位于两段已知序列之间的DNA片段，类似于天然DNA的复制过程。 以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5′末端和3′末端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。 扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合 基本反应步骤分三步： 1. 变性 (Denaturation)： 94℃ 30″ 加热使模板DNA双链间的氢键断裂而形成两条单链。 2. 退火 (复性) (Annealling): 55 ℃ 30 ″ 突然降温后模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合。 3. 延伸 (Extension): 72 ℃ 1′ 将反应温度调节到酶的最适温度，形成与模板链互补的新DNA链。 上述 3 步为一个循环，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25～40个循环后DNA可扩增106 ～ 109 倍。