实验七_黑曲霉发酵柠檬酸案例.pptVIP

实验七 黑曲霉发酵生产柠檬酸 实验目的 了解产物发酵生产的机理； 柠檬酸发酵的发酵条件 掌握发酵过程步骤 黑曲霉中存在TCA的酶系 柠檬酸的发酵的过程 80%的糖代谢走EMP途径 柠檬酸发酵的条件 1、合适的碳源（淀粉、麦芽糖、甘露糖等），高浓度的糖； 2、限制有机氮源、选择适量的无机氮源（铵盐）； 孢子培养基 ：要求能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，所以营养不要太丰富； 发酵培养基 ：既要使菌体能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能迅速合成所需产物 ； 3、合适的pH值，黑曲霉在pH为2～3的环境中发酵糖，产物以柠檬酸为主；当pH接近中性时则大量产生草酸， 而柠檬酸产量很低； 4、发酵液中溶氧量要高（摇床的转速250r/m）； 5、限制重金属离子，如Mn2＋缺乏促进EMP途径畅通， 控制Fe2＋含量使顺乌头酸酶活力降低，使柠檬酸积累 。 实验步骤 菌种获得 孢子悬液制备取约5mL无菌水至黑曲霉平板上，用灭菌滴管轻轻刮下孢子，振荡数下制成孢子悬液。 液体深层发酵取约4mL孢子悬液接种于玉米粉摇瓶发酵培养基中。在转速为200rpm旋转摇床上，30℃培养5～6天。 问题与思考 影响黑曲霉发酵生产柠檬酸的因素有哪些？ 黑曲霉柠檬酸pH控制 黑曲霉柠檬酸生产菌生长发育适宜PH3～7。在含糖合成培养基中，分生孢子在PH6.8—7.2