第4章蛋白质的共价结构范例.ppt

（一）肽的人工合成 保护（氨基、羧基、侧链活性基团） 活化（氨基、羧基） 缩合剂 （二）胰岛素的人工合成（三）固相肽合成 三、肽与蛋白质的人工合成 * * * * 2、化学裂解法 ①溴化氰水解法(Cyanogen bromide) ——选择性地切割由Met羧基形成的肽键。 （五）、多肽链的部分裂解和 肽段混合物的分离纯化 多肽链的选择性降解 ②NH2OH断裂： 较专一性断裂Asn-Gly之间的肽键 Asn-Leu及Asn-Ala键也能部分断裂 3、肽段的分离纯化： 凝胶过滤、凝胶电泳和HPLC法 N-端分析法特点：能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 1、 Edman法 （六）、肽段氨基酸序列的测定 （苯异硫氰酸酯法） Edman于1950年首先提出。 PITC PTC-肽 2、氨肽酶法或羧肽酶法 3、质谱法（MS） 灵敏度高、所需样品少、测定速度快 ?电喷射电离串联质谱法 蛋白溶液→毛细管静电分散→ 带电微滴→ 质谱仪 玻璃毛细管 样品溶液 高压电 质谱仪 真空界面 分离 裂解 核糖体 蛋白质链 4.根据核苷酸序列的推定法 用待测蛋白质做抗原免疫动物，得相应抗体； 用此抗体去沉淀合成此种蛋白质得多核糖体； 从沉淀中分离出该mRN