微生物检验技术第二部分要点.docVIP

核酸检验 DNA:中性环境带负电荷，变形后OD值升高。用二倍量乙醇沉淀DNA。 复制：半保留复制，限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。DNA多聚酶只能结合在一长段DNA单链的一小段局部双链结构上，才能顺利开始DNA合成。DNA多聚酶会切除错误的核苷酸。人工合成单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3‘末端的羟基上。大肠杆菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶是DNA聚合酶I,复制最重要的酶是DNA聚合酶III。该酶的核心聚合酶中具有3’-5‘外切酶活性的亚基是ε亚基。聚合酶Iklenow没有5‘-3‘外切酶活性。DNA修复过程中尿嘧啶糖基酶系统不包括SI核酸酶。体内DNA复制时必须有RNA引物。逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶不具备的。 转录：DNA解旋部位称启动子。大肠菌RNA聚合酶有5个亚基，σ亚基有启动子作用。 翻译：tRNA搬运氨基酸，rRNA是核糖体的骨架，mRNA直接决定蛋白质结构。终止密码：UAA/UAG/UGA。细菌里，依靠rRNA和mRNA之间一段互补序列能发现蛋白质合成开始位置。原核生物核糖体由16srRNA/23srRNA/5srRNA组成。真核生物核糖体H1组蛋白最不保守。 分子生物学基本技术： 质粒a1-200KB不等，双链闭环DNA分子，以超螺旋状态存在于宿主细胞中，具自主复制和转录能力。细菌质粒是重组DNA技术中的常用载体。质