2-DE流程—永诺生物.docVIP

6张胶 1. 蛋白质样品的CyDye荧光标记 荧光标记使用CyDye DIGE Flour（minimal Dye）Labelling Kit进行，所有涉及Dye的操作在避光条件下进行。 取出－20℃保存的CyDye试剂盒，室温放置5~8分钟以防开盖时凝露，12000g离心1分钟； 按照试剂盒说明：每个原始包装管中各有5nmol的粉状Dye，加入5μl无水DMF后震荡30秒、12000g离心30秒，即成1nmol/μl的dye stock solution； 按照CyDye最小标记法原则，即400pmol的Dye可以标记50μg的蛋白，根据实验设计计算出所需各种Dye的总量（Cy2、Cy3、Cy5各需2.4nmol）； 以dye stock solution : 无水DMF＝2 : 3的比例，将dye stock solution稀释成working dye solution (400pmol/μl)，即working dye solution 2.4ul加入无水DMF 3.6μl，震荡30秒、12000g离心30秒； （注意：各种dye的stock solution和working solution未用完者必须密封后储存于－20℃，stock solution最多可保存两个月，working solution配制好后必须在两周内用完。）； 在每个准备进行标记的样品管中，根据实验设