Chapter3酶概要.ppt

4. 米氏方程（Michaelis-Menten equation） 米氏方程也称Michaelis-Menten方程， 是Michaelis和Menten提出的（1913年）酶动力学基本原理的一个数学表达式。 Leonor Michaelis （1875－1949） Maud Menten （1879－1960） 4. 米氏方程（Michaelis-Menten equation） v: 反应速率； Vmax: 最大反应速率； [S]: 底物浓度 Km: 米氏常数 其中 Km 值称之为米氏常数， Vmax是酶被底物饱和时的反应速度。 当底物浓度非常大时，反应速度接近于一个恒定值。 在曲线的这个区域，酶几乎被底物饱和，反应相对于底物S是个零级反应。就是说再增加底物对反应速度没有什么影响。 酶促反应动力学 Briggs Haldane对米氏公式的推导（1925年） 稳态假设 [ES]是个恒定值 即： Briggs Haldane对米氏公式的推导（1925年） E + S ES E + P k 1 k2 K-1 k 4 ES生成的速度：k1([E]-[ES])[S] ES分解的速度：(k-1+k2)[ES] 稳态时：(k-1+k2)[ES]＝ k1([E]-[ES])[S] k-1 最大反应速度： 米氏常数： 米氏方程： k-1 k2 k2 k-1 k2 Km的意义： Km 为酶的特征性常数 Km 在数值上等于反应速度达到最大反应速度一半时底物的浓度，单位是mol/L。 Km 反映了 E 与 S 亲和力的大小。 Km 越小表明酶与底物的亲和力越大；反之越小。 Km值越小, 底物与酶的亲和力越强, 反应越迅速 酶促反应动力学 双倒数作图法 5. 影响酶促反应速度的因素 1） 酶浓度对反应速度的影响 底物浓度饱和时，酶促反应初速度与酶浓度成正比 2） 激活剂（activator）的影响 能使酶的活力提高的物质称为该酶的激活剂 激活剂是针对某种酶而言的 3） PH的影响－－最适PH 过酸或过碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶构象的改变，酶活性丧失。 当pH改变不很剧烈时，酶的活力受到影响。 pH影响维持酶分子空间结构的有关基团解离，从而影响了酶活性部位的构象，进而影响酶的活性。 pH对反应速度的影响 最适pH (optimum pH)： 酶催化活性最大时的环境pH。 0 酶 活 性 pH 胃蛋白酶 淀粉酶 胆碱酯酶 2 4 6 8 10 4） 温度的影响 最适温度 动物35～40℃ 植物40～50℃ 微生物差别较大，如TaqDNA聚合酶的可高达70 ℃ 酶的最适温度与PH、离子浓度、酶作用时间等因素有关。 6. 酶的抑制作用 一、不可逆抑制——抑制剂与酶以共价键结合 二、可逆抑制——抑制剂与酶以非共价键相结合 酶的抑制剂(inhibitor) 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂。 不可逆抑制中，抑制剂与酶分子形成一个稳定的共价键，事实上它是结合于酶的活性部位使酶失活的。 有机磷化合物、有机汞、有机砷化合物、氰化物等都是酶的不可逆抑制剂。 有机磷化合物能使以丝氨酸残基为活性部位的水解酶失活。这些水解酶称之为丝氨酸蛋白酶或丝氨酸酯酶。 某些有机磷化合物可以作为杀虫剂用于农业上。 一、 不可逆抑制剂 例： DFP 神经毒气（二异丙基氟磷酸（diisopropyl fluorophosphate，DFP））是有机磷化合物中的一员。 DFP与酶活性部位的丝氨酸残基反应生成二异丙基磷酰丝氨酸。所以可以用DFP来鉴定这类酶活性部位的丝氨酸残基。 神经毒气对神经极端有毒，这类有机磷化合物生物学上的作用主要是不可逆抑制乙酰胆碱酯酶，使乙酰胆碱不能分解为乙酸和胆碱，乙酰胆碱的堆积引起一系列神经中毒症状，所以也称为神经毒剂。 二、 可逆抑制 1. 竞争性抑制（Competitive inhibition） 2. 非竞争性抑制（Noncompetitive inhibition） 3. 反竞争性抑制（Uncompetitive inhibition） 1.竞争性抑制剂 竞争性抑制剂是生物化学中最常见的抑制剂。在竞争性抑制作用中，I只与未配位的酶分子结合。作用示意图如下： 可逆抑制 1. 竞争性抑制剂 当S和I都存在于溶液中时，酶能够形成ES的比例取决于S和I的相对浓度和酶对它们的亲和力。 特点 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及［S］； I与S结构类似，竞争酶的活性中心； 动力学特点：Vmax不变，表观Km↑。