双水相萃取的原理及应用案例分析.pptVIP

影响双水相萃取的因素 ATPE 的基本原理 聚合物分子量的影响： 如以Dextran 500(MW 500 000)代替Dextran 40（MW 40 000）,即增大下相高聚物的分子量，被萃取的低分子量物质如细胞色素C分配系数增加并不显著。然而，被萃取的大分子量物质，如过氧化氢酶的分配系数可增大到原来的6~7倍。 影响双水相萃取的因素 ATPE 的基本原理 pH 值的影响：改变两相的电位差 如体系pH值与蛋白质的等电点相差越大， 则蛋白质在两相中分配越不均匀。 pH值的变化也会影响磷酸盐的离解程度，导致组成体系的物质电性发生变化，也会使被分离物质的电荷发生改变，从而影响分配的进行。 影响双水相萃取的因素 ATPE 的基本原理 离子环境对蛋白质在两相体系分配的影响: 在双水相聚合物系统中，加入电解质时，其阴阳离子在两相间会有不同的分配。 同时，由于电中性的约束, 存在一穿过相界面的 电势差(Donnan电势) ,它是影响荷电大分子，如蛋白质和核酸等分配的主要因素。 影响双水相萃取的因素 ATPE 的基本原理 例如，DNA萃取时，离子组分微小的变化可使DNA从一相几乎完全转移到另一相。 ATPE 的基本原理 离子液体BmimPF6直接萃取DNA ATPE 的基本原理 基于离子液体BmimPF6的双水相体系直接萃取牛血清蛋白。 双水相的特点 ATPE 的特点 对生物物质、天然产物、抗生素等的提取、纯化方面的优势：(1)含水量高(70％~90％)，在接近生理环境的体系中进行萃取，避免生物活性物质失活或变性。 (2)可以直接从含有菌体的发酵液和培养液中提取所需的蛋白质（或酶），可直接提取细胞内酶，避免破碎或过滤等步骤。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 (3)分相时间短，自然分相时间一般为5min～15 min。 (4)界面张力小(10-7～ 10-4mN／m)，利于两相之间的质量传递。 (5)不存在有机溶剂残留问题，高聚物不易挥发，对人体无害。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 (6)大量杂质可与固体物质一同除去。(7)易于工艺放大和连续操作，与后续提纯工序可直接相连接，无需进行特殊处理。(8)操作条件温和，在常温常压下进行。(9)亲和双水相萃取技术可以提高分配系数和萃取的选择性。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 虽然该技术在应用方面已经取得了很大的进展，但几乎都是建立在实验的基础上，到目前为止还没能完全清楚地从理论上解释双水相系统的形成机理以及生物分子在系统中的分配机理。 双水相的特点 ATPE 的基本原理 不足之处: 如易乳化、成相聚合物的成本较高、分离效率不高等, 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 双水相系统平衡时间短，含水量高，界面张力低，为生物活性物质提供了温和的分离环境。它还具备操作简便、经济省时、易于放大。据报道，系统可从10ml直接放大到1m3规模（105倍）,而各种试验参数均可按比例放大，产物收率并不降低。  双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 英英释义 1、蛋白质、酶的纯化 2、多肽的分离纯化 3、核酸的分离纯化 4、其它分离纯化 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 主要是分离蛋白质 ，酶，病毒，脊髓病毒和线病毒的纯化，核酸，DNA的分离，干扰素，细胞组织，抗生素，多糖，色素，抗体等。 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 1) 蛋白质、酶的纯化 2) 多肽的分离纯化 双水相萃取的应用 ATPE 的基本原理 目前，用此法来提纯的酶已达数十种，其分离过程也达到相当规模，I-Horng Pan等人利用PEG1500/ NaH2PO4体系从Trichoderma koningii发酵液中分离纯化β-木糖苷酶，该酶主要分配在下相，下相酶活回收率96.3%，纯化倍数33。  ATPE 的基本原理 以蛋白质的分离为例说明双水相分离过程的原则流程: 包括三步双水相分离, 第一步：所选择的条件应使蛋白质产物分配在富PEG的上相中, 而细胞碎片及杂质蛋白质等进入下相。 ATPE 的基本原理 以蛋白质的分离为例说明双水相分离过程的原则流程: 包括三步双水相分离, 第二步：分相后上相中再加入盐使再次形成双水相体系,核酸和多糖则分配入富盐的下相,杂质、蛋白质也进入下相,而所需的蛋白质再次进入富含PEG的上相。 ATPE 的基本原理 以蛋白质的分离为例说明双水相分离过程的原则流程: 第三步：向分相后的上相中加入盐以再一次形成双水相体系。在这一步中,要使得蛋白质进入富盐的下相,以与大量的PEG分开。蛋白质与盐及PEG的分离可以