(护理本科)07、第7章 细菌感染的检测方法与防治原则.docx

第7章、细菌感染的检测方法与防治原则2016-3-23本章重点与难点细菌感染性标本的采集原则细菌感染的实验室检验程序常用的血清学诊断方法适应性免疫的获得方式人工免疫的概念和常用的免疫制剂细菌感染的治疗原则2第一节细菌感染的实验诊断3细菌感染的实验室检验方法掌握含菌标本可疑细菌感染血清（双 份）标本形态学检查细菌分离培养与鉴定抗原 检测细菌成分检测核酸 检测特异性抗体检测细菌培养、形态学检查生物试验、血清学鉴定动物试验、药物敏感试验凝集试验、免疫荧光技术酶免疫技术、免疫印迹试验等核酸杂交、PCR16S rRNA基因序列分析基因芯片等直接凝集试验乳胶凝集试验补体结合试验ELISA等一.临床标本的采集与运送原则标本采集标本运送早期采集无菌操作做好标记选感染部位置于密闭容器内最佳时间采集尽快送检双份血清二、细菌的检测6（一）细菌的形态学检查暗视野相差显微镜显微镜不染色标本主要用于检查在生活状态下细菌的动力及其运动情况7革兰荧光金胺染色O染色抗酸其他特殊染色染色细菌的染色8革兰染色葡萄球菌（革兰染色阳性）大肠埃希菌（革兰染色阴性）99(二) 细菌分离培养与鉴定细菌检查的一般程序脓/痰/尿 涂片、染色、镜检生化反应标本血清学鉴定分离培养纯培养药敏试验动物实验血、脑增菌脊液等10细菌的分离培养培养基的成分pH培养时间温度气体环境在血平板上的肺炎链球菌菌落11生化试验肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应12血清学鉴定利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌对细菌进行种、群、型的鉴定沙门菌血清学鉴定摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社13药物敏感试验纸片扩散法、稀释法、E-test法……最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）– 能够完全抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）– 能够杀死培养基中细菌的最低药物浓度14纸片扩散法含有定量抗生素的纸片贴在已接种待检病原菌的琼脂平板上，纸片上的抗生素向周围琼脂中扩散，形成了逐渐减小的药物浓度梯度。检测抑制病原菌生长的大小不同的抑菌环。根据抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐药或敏感。15稀释法以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的培 养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍 稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。稀释法– 琼脂稀释法——使用琼脂培养基– 肉汤稀释法——使用肉汤培养基16抗生素连续梯度法（E-test法）将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌浓度（MIC）。17自动微生物鉴定及药敏分析系统将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、读数、分析、最后报告鉴定及药敏结果。摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社18自动微生物鉴定及药敏分析系统微生物数码鉴定原理计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和药敏检测原理微型化的肉汤稀释试验 根据CLSI标准得到相应敏感度：敏感、中度 敏感和耐药自动微生物鉴定及药敏分析系统系统组成测试卡（板）、菌液 接种器、培养和监测 系统、数据管理系统性能特点自动化程度较高、检测速度快、可鉴定细菌种类及药敏试验种类多、数据处理软件功能强大、结果准确可靠19（三）细菌抗原的检测凝集试验协同凝集试验免疫荧光技术对流免疫电泳酶免疫技术用已知抗体检测待检标本中未知的颗粒性抗原。IgG的Fc段与金葡菌的SPA结合，Fab段与细菌抗原结合后，可使金葡菌发生肉眼可见的凝集现象。用已知的荧光抗体检测待检标本中的未知抗原，借 助荧光显微镜观察。利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合的方法。由于电泳 和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在比 例合适处形成肉眼可见的沉淀线。用酶标记的抗体检测特异性可溶性抗原的实验技术。20（四）细菌核酸的检测PCR（含RT-PCR、real time PCR等）16S rRNA基因序列分析核酸杂交技术基因芯片技术21（五）生物芯片技术将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上，在一定的条件下进行生化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果，通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。22生物芯片的分类– 基因芯片（gene chips），又称DNA芯片– 蛋白质芯片– 细胞芯片– 组织芯片– 糖芯片23三、细菌感染的血清学诊断由于本实验多采取病人血清检测抗体，故常称为血 清学诊断（serological diagnosis）