五味中药对灵芝液体发酵过程的影响.docVIP

五味中药对灵芝菌液体发酵过程的影响 摘要观察中药对灵芝菌液体发酵过程中生物量和胞外多糖的影响。麻黄、莱蔗子、金银花和 连翘4味中药对生物量有明显促进作用。黄岑对灵芝生长有抑制作用。 关锐词中药,灵芝,发酵,多糖 灵芝(Ganodermalucidum)为担子菌纲, 多孔菌科,灵芝菌属真菌,自古以来就是我国名 贵药用真菌。现代医学研究证明,灵芝中所含 的灵芝多糖和灵芝酸类物质能提高肌体免疫 力,延缓衰老,对老年慢性支气管炎有明显的疗 效。为了定向强化灵芝的药效,作者将中药添 加到灵芝液体培养基中,观察中药成分对灵芝 菌丝体生长及代谢产物胞外多糖的影响。 1材料和方法 1.1材料 灵芝菌:研究室保存的菌种。种子培基养: 葡萄糖209/L,玉米粉109/L,鼓皮粉59/Lo 基础培养基:葡萄糖409/L,蛋白陈49/L,Mg- 5040·759/L,K姚pO41·59/L,几、10mg/LO 中药材:购自无锡山禾药业集团。无水 NaZs氏,HZS()4市售分析纯。 1.2方法 1 . 2.1中药的粉碎 称取中药材,粉碎,过40目筛。药粉用于 灵芝液体培养。 1 . 2.2接种培养 将药粉按一定比例加入250mL三角瓶中, 加入基础培养基溶解。121℃灭菌30min。冷 却后接入灵芝液体菌种,接种量10%。摇瓶条 件:三角瓶250mL,装液量70mL,30℃,转速 150叮min,培养时间7d。 1.2.3生物量的计算 发酵液经离心,沉淀,用水洗涤3次,再次 离心,沉淀,在105OC烘干至恒重,称得生物量。 1 . 2.4胞外多糖的计算 将发酵液离心所得上清液合并,减压浓缩 到发酵液体积的2/5一1/2,加95%乙醇到乙醇 含量为30%,4oC静置24h。离心,弃去沉淀, 向上清液中再加95%乙醇到乙醇含量达到 60%,4℃静置24h。离心,沉淀用60%乙醇水 溶液分散,再离心,弃去上清液,以此法清洗沉 淀,去除沉淀中夹带的少量单糖和低聚糖。沉 淀洗2次。再次离心后的沉淀用蒸馏水溶解并 定容到25mL,然后用浓玩s氏一苯酚法测多糖 含量。 2结果 2 . 1中药对生物t的影响 2 . 1 . 1不同品种中药对灵芝菌生物量影响的 比较 培养基中分别加入5味不同的中药,接种 培养后所得生物量如表1,其中的对照样为在 不添加中药的基础培养基培养的结果,其他条 件相同。从表1可见,加黄等、连翘和金银花的 样品生物量比对照样低得多,说明这些中药对 灵芝菌的生长可能存在抑制作用;麻黄和莱旅 子样品的生物量 . 比对照样高,说明这些中药对 灵芝菌的生长可能有一定的促进作用。 2.1.2中药用量的影响 在基础培养基相同的条件下,改变中药用 量,灵芝的生物量也受到影响。结果如图1 第一作者:硕士研究生。 收稿时间:2003一12一05.改回时间:2004一03一09 (46)(I,H)所示。 表1中药对生物t的影响 中药名称 加药量生物量 用量下不会抑制灵芝生长,而在0.6259/mL以 上则会显著抑制灵芝生长。 2.2对胞外多糖的影响 对生物量不会产生大的抑制作用的4味中 药对灵芝菌在液体培养下产生胞外多糖旱的影 响结果见表2。 表2中药对胞外多枯的影响 中药用量胞外多搪 中药名称 ,于,,工R内J内、 …… 内JLU弓JJ门‘,l‘U..立..1丹j八乙0000000朋00对照样 黄苹(R.“tel纽~) 金银花(月“肠nice。) 连翘(介“之。Fo移皿h二) 麻黄(E琳耐栩:动1ca腼Pf) 莱旅子(反~尺“刘巨爪) 45 4《) 对照样0318 金银花(月。:肠nicerae)100236 连翘(开uct“:Forsy之hzae)100229 麻黄(万助己己msinlcas勿pf)2001451 莱放子(menRaPhan￡)1001177 从表2可见,金银花和连翘对灵芝胞外多 糖分泌量没有明显的影响,而麻黄和莱旅子能 成倍增加胞外多糖分泌量。 0n‘ 山·圳妙州娜 2O旬6O 中药用 801001201引) 量29·L一,3讨论 叨 30 斗金银花 一连翘 .山·妙圳浑好 01,.. … , } 406()801001201钓l印l8()20()2202绷】 中药用量lg·L-, 图1中药用量对灵芝生物量的影响 从图1可见,随着5味中药用量的增加,生 物量均下降,表现为一定程度的抑制作用。但 是,加麻黄、莱兼子的样品虽然有随中药量增加 生物量下降的趋势,但生物量的绝对值却比不 加中药的对照样高。因此,这2味中药对灵芝 菌的生长可能同时存在促进因子和抑制因子, 促进因子使生物量比对照样的大,而中药用量 的增加,使抑制因子的作用增加,所以生物量下 降。加黄芬的发酵液生物量比对照样刁、得多, 说明抑制作用较强。连翘的用量达到1009/L 时有很强