实验四植物胚的初代培养合编.docVIP

实验四、植物胚的初代培养 实验目的 掌握外植体的选取与消毒技术 掌握无菌操作接种技术 二、实验原理 离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞），统称为体细胞胚或胚状体。胚状体的形成是指从培养的组织或细胞中直接或间接形成胚胎的生长方式。直接形成胚胎是指在外植体上直接分化出胚状体；间接形成胚胎是指在外植体上先分化出胚性愈伤组织，然后由胚性愈伤组织再分化形成胚状体。 初代培养：即接种某种外植体后，最初的几代培养。初代培养旨在获得无菌材料和无性繁殖系。初代培养时，常用诱导或分化培养基，即培养基中含有较多的细胞分裂素和少量的生长素。初代培养建立的无性繁殖系包括茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。 脱分化：已经分化的植物器官、组织或细胞，当受到创伤或进行离体（也受到创伤）培养时，已停止分裂的细胞，又重新恢复分裂，细胞改变原有的分化状态，失去原有结构和功能，成为具有未分化特性的细胞 ? 脱分化的机理：离体后细胞膜的透性改变，细胞核增大，内质网扩大，蛋白质，酚类物质的合成活跃，从中完成了脱分化。 ? 再分化：已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株 影响再分化的因素：损伤 培养基中成长素与细胞分裂素的配比 培养条件，光照温度 细胞团的位置 外植体的生理状况 植物体种类差异 .愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞的分裂增值形成一团无特定及结构和功能的薄壁细胞群。 育体培养的细胞组培由脱分化状态重新进行分化，形成种或几种细胞组织器官，甚至发育为完整植株的过程。 ? (二)培养方法 1．固体培养法 ：即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。该法设备简单，易行。但养分分布不均，生长速度不均衡。并常有褐化中毒现象发生。 2．液体培养法：即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少，常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给，采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速度一般为50～100转／min，这种定期浸没的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。 3、外植体的生长与分化 （2）不定芽发育 在初代培养中一些植物的叶片、不带腋芽茎段先脱分化形成愈伤组织，再从愈伤组织块上分化形成不定芽；而有些植物，如球根秋海棠、非洲紫罗兰、百合、贝母等，不定芽可直接从外植体表面受伤的或没有受伤的部位直接分化出来。 ( 3)原球茎发育 （4）胚状体发育：胚状体是由体细胞形成的、类似于生殖细胞形成合子胚发育过程的胚胎。胚状体可以从愈伤组织表面，也可由外植体表面已分化的细胞或从悬浮培养的细胞中产生。胚状体发育出的再生小植株与腋芽苗或不定芽苗有显著差异：一是胚状体在形成的最初阶段，多来自单个细胞或多个细胞团，很早就具有明显的根端于苗端的两极分化，极幼小时就是一个根芽齐全的微型结构，通常不需要诱导生根阶段；二是由胚状体发育成的植株成的植株与周围的愈伤组织或母体组织块之间，几乎没有什么结构性的联系，小植株是独立形成的，易于与其他部分分离，胚状体小植株通过振摇或镊子、解剖针等轻拔就可彼此分开。而由腋芽或不定芽发育来的小植物，它们最初由分生细胞团形成单极性的生长点发育而来，随后再转移到生根培养基上形成根，才能形成完整的小植株。通常它们与母体组织块或愈伤组织之间有着较紧密的连接，包括一些维管束、皮层和表皮组织等，因而不易分离，在转移时往往用刀切才能分开。 4、?胚培养的类型成熟胚(mature embryo)培养；幼胚(immature embryo)培养 1.双子叶植物：合子—原胚—球形胚—心形胚—鱼雷胚和极胚—子叶胚 2.单子叶植物：合子—原胚—球形胚—盾形胚 3.离体培养植物： 外植体—愈伤组织--球形胚—心形胚—鱼雷胚和极胚—子叶胚 ? （一）培养 指把培养材料放在培养室（有光照、温度条件）里，使之生长，分裂、化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程 (二)培养方法 1．固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。该法设备简单，易行。但养分分布不均，生长速度不均衡。并常有褐化中毒现象发生。 2．液体培养法 即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少，常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给，采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速度一般为50～100转／min，这种定期浸没的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。 3、外植体的生长与分化