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microRNA反转和定量引物设计原理实验方法
microRNA的引物设计 AGCTACATCTGGCTACTGGGTCT
反向引物：每个反向引物的都带有一段固定的序列，可以形成一个茎环，
固定的序列为：5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3，
在这个序列后加上八个碱基，这八个碱基是ssc-miR-222-3p从后面数八个碱基的反向互补序列，就是CTGGGTCT 的反向互补：AGACCCAG ，最后得到的反向引物的序列为
5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG AGACCCAG -3，?
正向引物：每个正向引物也带有一段固定的序列，固定的序列为：ACACTCCAGCTGGG
在这个序列后加上于成熟体除后面六个外剩下的碱基序列，成熟体除掉后面六个碱基后序列为：AGCTACATCTGGCTACT
5，-ACACTCCAGCTGGG AGCTACATCTGGCTACT -3，?
URP：统一反向引物，也是一段固定的序列，TGGTGTCGTGGAGTCG
U6引物F-CTCGCTTCGGCAGCACA ，R-AACGCTTCACGAATTTGCGT
使用方法：
1逆转的引物：所有要做的miRNA反向引物的混合，每个10微升
2PCR的引物：50微升的体系，30微升的水，10微升的正向引物，10微升的URP
2．hsa-miR-124（hsmq-0032 引物） 推荐退火温度：60 hsa-miR-124 扩增曲线示意图 hsa-miR-124 融解曲线示意图 3．hsa-miR-125b(hsmq-0034 引物) 推荐退火温度：60 hsa-miR-125b 扩增曲线示意图 hsa-miR-125b 融解曲线示意图 4．hsa-miR-137(hsmq-0035 引物) 推荐退火温度：60 hsa-miR-137 扩增曲线示意图 hsa-miR-137 融解曲线示意图 5．hsnRNA U6 引物测试 推荐退火温度：60 hsnRNA U6 扩增曲线示意图 hsnRNA U6 融解曲线示意图 6. 电泳结果 取5μl PCR 产物进行电泳,胶浓度（3％）,所有检测都为两个阳性,一个NTC 其中泳道1 为hsa-miR-16、泳道2 为hsa-miR-124、泳道3 为hsa-miR-125b、泳道4 为 hsa-miR-137、泳道5 为hsnRNA-U6[img]
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