动物细胞融合与单克隆抗体的制备概要.pptVIP

动物细胞融合 * 文昌市田家炳中学 谭琦 考纲对该知识点的要求:Ⅱ 教学目标: 举例说出动物细胞融合与单克隆抗体 的原理和应用 重点: 单克隆抗体的制备和应用 难点: 单克隆抗体的制备过程 理解所列知识和其他相关知识之间的联系 和区别,并能在较复杂的试题情境中综合运用 其进行分析、判断、推理和评价。 一、动物细胞融合 1、概念： 2、原理： 3、方法： 4、细胞融合完成的标志： 6、应用： 5、意义： 特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体 是指两个或多个动物细胞结合形成一个 细胞的过程。 生物膜的流动性。 聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。 细胞核融合成一个核. 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段； 植物体细胞杂交与动物细胞融合比较 用途 诱导方法 融合前处理 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 生物膜的流动性、 植物细胞的全能性 生物膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、生物方法 获得部分或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体 什么是抗体？ ※．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体 ※．动物在免疫反应过程中,体内的B淋巴细胞可以 产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具 有特异性免疫作用。 ※．每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体. 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与 该抗原结合发挥特异性免疫功能的球蛋白。 1.单克隆抗体制备过程 诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 杂交瘤细胞有何特点? 注射抗原的目的是什么 提取大量单克隆抗体的场所有哪些? 整 个 制 备 过 程 为 何 要 经 过 两 个 阶 段 的 筛 选 ？ 第一阶段：用特定的选择性 培养基筛选出多种杂交瘤细胞 第二阶段：获得足够数量的能产 生所需专一抗体的杂交瘤细胞 第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。 第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。 第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。 1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠 2、B淋巴细胞 3、选择培养基 4、必须经过专一抗体阳性检验 下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。 2、单克隆抗体的概念 由单个杂交瘤细胞通过无性繁殖(也就是 通过克隆)形成细胞群，由这一细胞群所产 生的化学性质单一（纯度高）、特异性强的 抗体称为单克隆抗体。 3、主要优点： 特异性强、灵敏度高，并可能大量制备 4.单克隆抗体的应用： （１）.作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与抗原发生特异性结合 （2）.用于 运载药物：制成“生物导弹” 治疗疾病：主要用于癌症治疗 优点：准确、高效、简易、快速 优点:疗效高、毒副作用小 促融方法 融合前 处理 理论基础 (原理) 单克隆抗体的制备 (动物细胞融合) 植物体细胞杂交 植物体细胞杂交与单克隆抗体的制备的比较 生物膜的流动性、 细胞的全能性 生物膜的流动性、 细胞增殖 酶解法去除细胞壁 (纤维素酶、果胶酶) 注射特定抗原,免疫 处理正常小鼠 (1)物理法：离心、振动、 电激等 (2)化学法：聚乙二醇(PEG) (1)物理、化学法：与植物 细胞融合相同 (2)生物法：灭活的病毒 第四步 第三步 第二步 第一步 过程 原生质体的制备 (酶解法) 正常小鼠 免疫处理 原生质体的融合 (物、化法) 动物细胞的 融合(物、 化、生法) 杂种细胞的 筛选和培养 杂交瘤细胞 的筛选与培 养 杂种植株的 诱导与鉴定 单克隆抗体 的提纯 意 义 和 用 途 克服远缘杂交 不亲和的障碍, 大大扩展杂 交的亲本组合 范围. (1)制备单克隆抗体 (2)诊断试剂、治疗 疾病与运载药物。 例如:单抗诊断盒、 “生物导弹”治疗癌症 单纯疱疹病毒I型(HSV-I)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤 技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。 回答下列问题： (1)在制备抗HSV-I的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化 的HSV-1蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗____ 的 抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了____ 反应，再从小鼠的____中获取B淋