基因工程课件3——实验2：质粒DNA的酶切及电泳鉴定概要.pptVIP

实验二——质粒DNA的酶切及电泳鉴定 实验目的要求 1、掌握限制性内切酶的特性、作用 2、学习琼脂糖凝胶电泳的方法 一、背景知识（核酸内切限制酶） 二、实验原理（琼脂糖凝胶电泳） 三、实验材料 四、实验步骤 五、预期结果 六、注意事项 （一）核酸内切限制酶 1、核酸内切限制酶的类型 按限制酶的组成、与修饰酶的活性关系以及切断核酸的情况不同，分为三类：Ⅰ型、Ⅱ型*、Ⅲ型 I型和III型酶一般都是大型的多亚基的蛋白复合物，既具有内切酶的活性，又具有甲基化酶的活性——限制-修饰酶。切割的位点是随机的，没有专一性，不适合于基因工程技术。 (II型) 酶是一种分子量较小的单体蛋白，只有一种多肽，并通常以同源二聚体形式存在。其核酸内切酶活性和甲基化作用活性是分开的，且识别和切割的核苷酸都是专一的。因此，这种限制性内切酶是基因工程技术中最常用的工具酶之一 2、核酸内切限制酶的基本特性（ II型） （ⅰ）在DNA分子双链的特异性识别序列部位，切割DNA分子产生链的断裂； 识别序列通常由4～8个碱基对组成，呈回文结构 限制酶切割DNA后，均产生含5’磷酸基和3’羟基的末端。 粘性末端：交错切割结果形成的DNA限制片段具有粘性末端。 EcoRI的识别顺序为： 5’…… G| AA TT C……3’ 3’……