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植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂盒产品说明书 （中文版） 主要用途 植物细胞内氧化应激活性氧超氧阴离子红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氢溴化乙啶，在细胞氧化条件下，产生红色荧光，来检测细胞内超氧阴离子活性氧族的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种其适用于新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，滞留持久，荧光清晰。 技术背景 超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。二氢溴化乙啶（Dihydroethidium bromide；Hydroethidine；DHE）是一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不外漏的染色剂。一旦被超氧自由基阴离子氧化，二氢溴化乙啶转化为溴化乙啶，进入细胞核，与DNA紧密结合，便产生荧光。据此证明细胞内超氧阴离子活性氧族的存在。 产品内容 清理液（Reagent A） 毫升 固着液（Reagent B） 毫升 离析液（Reagent C） 毫升 染色液（Reagent D） 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里； 固着液（Reagent B）和 离析液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月 用户自备 胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离 完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基 15毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器 1.5毫升离心管：用于染色液配制的容器 载玻片：用于组织染色操作 解剖针：用于植物组织解剖 血细胞计数仪：用于细胞计数 （微型）台式离心机：用于样品处理 培养箱：用于染色孵育 比色皿或酶标板：用于荧光定量分析的容器 （共聚焦）荧光显微镜：用于荧光分析 细胞流式仪：用于用于细胞染色分析 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析 实验步骤 方法一：活体组织染色 加上xx微升 清理液（Reagent A）在载玻片上 切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的 清理液（Reagent A）中 用解剖针小心压碎根尖 小心移去 清理液（Reagent A） 小心加上xx毫升 清理液（Reagent A）在根尖上 再加上xx微升 染色液（Reagent D） 放进37℃培养箱里孵育20分钟 取出载玻片，移去染色液 小心加上xx毫升 清理液（Reagent A） 小心移去 清理液（Reagent A） 盖上盖玻片，用拇指小心且垂直加压 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高 方法二：组织固定染色 加上xx微升 清理液（Reagent A）在载玻片上 切取新鲜植物根尖，放进载玻片上的 清理液（Reagent A）中 用解剖针小心压碎根尖 小心移去 清理液（Reagent A） 小心加上xx毫升 固着液（Reagent B） 室温下，孵育3小时，避免干化 小心移去 固着液（Reagent B） 小心加上xx毫升 清理液（Reagent A） 小心移去 清理液（Reagent A） 小心加上xx毫升 离析液（Reagent C） 室温下孵育5分钟 小心移去 离析液（Reagent C） 小心加上xx毫升 清理液（Reagent A） 小心移去 清理液（Reagent A） 小心加上xx毫升 清理液（Reagent A）在根尖上 再加上xx微升 染色液（Reagent D） 放进37℃培养箱里孵育20分钟 取出载玻片，移去染色液 小心加上xx毫升 清理液（Reagent A） 小心移去