海洋生物技术实验课件-方再光.ppt

实验一、微藻原生质体的分离 实验目的 1. 了解微藻原生质体分离的原理、方法与技术； 2. 熟练、掌握原生质体分离的基本操作过程。 实验原理 根据藻类细胞脱壁程度的不同，Adamich将脱壁后的藻细胞定义为原生质体（protoplast）和原生质球（spheroplast）。原生质体是指任何基因型的藻细胞其质膜外的细胞壁和包被层被全部除去而保持其余细胞组分的部分；原生质球是任何基因型的藻细胞其细胞壁被全部或部分除去，仍保留质膜外包被层的含全部细胞内组分的部分。 海洋微藻因其细胞壁组成的明显差异，原生质体的分离方法很多，例如蓝绿藻的细胞壁含有粘肽，因而可以用溶菌酶处理获得蓝绿藻细胞的原生质体。绿藻的细胞壁主要成分是纤维素，所以可以用纤维素酶处理而获得原生质体或原生质球。硅藻和甲藻因其特殊的细胞壁组成和结构，可用去污剂或富含有机物但缺乏二价阳离子的溶液处理而达到分离原生质体的目的。红藻和褐藻则可用多糖酶消化细胞壁成分来制备原生质体。尽管有这样多的方法，但目前普遍采用的方法是酶解的方法。 仪器与试剂 1、仪器 ①恒温水浴；②低速离心机；③冷冻离心机；④离心管40-50ml;⑤三角烧瓶；⑥显微镜，荧光显微镜。 2、试剂与酶 ①酶：纤维素酶（Onozuka R-10）,离析酶；②浸透压调节剂：甘露醇、山梨醇和Nacl；③密