第七章 PCR技术-LXG-2005-4课件.pptVIP

DNA模板变性 (denature)： 95℃左右高温使模板DNA完全变性 单链DNA模板与引物退火 (annealing)： 引物与模板形成复合物的几率DNA分子自身的复性 引物的延伸 (extension)： DNA聚合酶在最适温度下催化DNA合成反应 PCR技术的特点 高度的敏感性：是最主要的特点，25个循环可扩增106倍，它可对单拷贝、单根头发、一滴血等微量标本进行分析 高度的特异性：取决于2个引物设计的好坏，依赖于引物与模板结合的正确性，退火温度 操作简便、快捷 适用样品的广泛性 第一节 PCR的反应体系 寡核苷酸引物 PCR反应缓冲液 耐热DNA聚合酶 dNTP 模板DNA PCR反应引物的常用浓度范围 PCR反应中引物的浓度是0.1～1μmol/L 在100μl中引物的量为25～100 pmol, 假如用25μmol/L浓度的引物贮备液只需加1～ 4μl 寡聚核苷酸引物溶液浓度的计算与配制 1 OD260= 33μg单链寡聚核苷酸(oligo) 5 OD260= 165μg Mw的计算: ① = nA×312+nC×288+nG ×328+nT×303-61 = 5×312+4×288+5×328+3×303-61=5200 ② = 碱基数×324.5(每个碱基的平均Mw) =