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IIO玻璃芯片上温度分布对成肌细胞生长增殖的影响 　　摘 要：为了研究不同温度对小鼠成肌细胞生长增殖的影响在IO玻璃芯片上加载电场形成一定的温度分布在不同温度（38、39、0和1℃）所对应的区域加工相同尺寸的PM微型培养腔室用于小鼠成肌细胞的培养通过对芯片上培养的小鼠成肌细胞连续d的热刺激（30min/d）研究不同温度短期热刺激对成肌细胞增殖的影响细胞形态显微观察和流式细胞仪检测结果表明一定的温度刺激对小鼠成肌细胞的增殖有促进作用其中0℃刺激后的细胞数目增加最明显在总刺激时间（30min）相同情况下短时多次热刺激的效果更理想细胞增殖指数最高可达3839 　　关键词：IO玻璃；成肌细胞；热刺激；细胞周期；细胞增殖 　　013011收稿；01301接受 　　本文系国家自然科学基金（Nos81071783107088）教育部“新世纪优秀人才支持计划”（NoNCE0908）和中央高校基本科研业务费“研究生科技创新基金”项目（NoCX113006）资助 　　1 引 言 　　温度与细胞生长关系密切一直是细胞体外培养研究中的热点细胞体外培养的适宜温度一般为37～38℃温度过高或过低都会影响细胞的生长将乳腺癌肿瘤细胞系MAM31在37～℃进行培养观察表明温度的变化会影响细胞形态改变细胞骨架从而改变细胞生长状况或者引起细胞死亡＼1＼另一些实验则证实较低的温度可以促进某些细胞对特定蛋白质的表达＼＼ 　　细胞温度特性的研究促进了其在临床应用中的快速发展＼3＼目前热物理治疗已成为发展最快的临床医学物理学方法之一它常作为一种简单、有效的治疗方式广泛用于肌肉损伤修复中＼＼热物理治疗所引起的肌肉细胞的变化机制目前仍不是十分明确热刺激对成肌细胞（keletalmyoblast）生长状态的影响可能是其中的一个重要途径＼＼成肌细胞是指胞浆中含有肌丝的肌组织前体细胞来源于中胚层干细胞胚胎发育都经历了由间充质细胞分化为成肌细胞然后分裂、融合成为多核肌纤维形成肌小管再进一步分化为成熟肌细胞的过程在成熟个体中不含成肌细胞而是以处于静止状态的肌卫星细胞的形式存在该卫星细胞位于肌纤维基底膜与肌膜之间当肌肉发生损伤时卫星细胞就会被激活大量增殖、融合并分化产生新生肌纤维＼6＼在临床和基础研究中通过成肌细胞自我更新和促进肌纤维再生可治疗各种肌肉拉伤、损伤、冻伤和肌肉丢失性疾病所以成肌细胞的增殖速度、融合率的高低直接影响疾病治疗的效果在热物理治疗中合适的热刺激强度对成肌细胞的生长增殖至关重要体外培养成肌细胞并观察不同温度对其增殖的影响对指导肌肉损伤的热物理治疗有积极意义 　　目前关于细胞温度特性的研究常采用细胞培养器皿整体加热的方式实现细胞易污染每次只能进行单一温度的测试分析＼7＼而且实验步骤繁琐、细胞和试剂消耗大实验观察不方便微加工和微流控技术的发展特别是微全分析系统概念的提出＼8＼开创了细胞芯片这一新的研究领域而基于IO玻璃的微芯片在温度控制、实验操作和观察方面具有突出优点＼9＼因此本研究利用IO玻璃作为加热源和细胞培养芯片的基底考察温度短期热刺激对成肌细胞生长增殖的影响本方法可以实现准确的温度控制成肌细胞的热刺激响应测试结果与传统水浴方法一致而且在同一芯片上可以同时研究多个温度、温度刺激模式甚至一定温度梯度对细胞的影响与传统方法相比本方法操作简单、效率更高、试剂消耗少、便于观察分析 　　实验部分 　　1 仪器与试剂 　　CO细胞培养箱（美国orma公司）超净工作台（中国冠鹏净化公司）倒置显微镜、数码照相机（日本Olympus公司）台式离心机（日本ubota公司）流式细胞仪（美国ectonickinson公司）恒流源（上海实博教仪公司）等离子清洗仪（中国恒业电子公司）红外测温仪（中国华盛昌公司）IO单面导电玻璃（龙乾玻璃厂） 　　成肌细胞培养基包含78%am10动物细胞培养基（美国yclone公司）0%胎牛血清（etalcalfserum美国yclone公司）；胰蛋白酶（北京翰谱公司）；1%NaCO3、1%青链霉素、Ⅰ型胶原蛋白（上海碧云天公司）；聚二甲基硅氧烷（PolydimethylsiloxanePM美国owCorning公司）；P缓冲液（汇林试剂公司） 　　芯片加工 由于PM具有很强的通气性和可塑性可用来制作微型培养腔室＼1011＼：首先将PM单体与固化剂按10∶1均匀混合脱气除去气泡后均匀浇注在水平放置的模板框槽中80℃固化1h后再从模板上取下 　　图1 细胞培养微芯片 　　ig1 Microchipforcellculture 　　IO：Indiumtinoxide；PM：polydimethylsiloxane 　　形成一个与IO玻璃等边长的厚度为0cm的胶块即边长为cm×cm×0cm；根据仿真及测量结果在玻璃表面不同温度