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X射线对黑花生真叶多酚氧化酶活性的影响 　　摘要：为了研究X射线辐照对黑花生紫1F4真叶中多酚氧化酶（PPO）活性的影响，采用不同能量的X射线辐照黑花生种子，并在光照培养箱中培养，待其长出真叶后，提取PPO，测定PPO的活性。结果表明，PPO活性总体上随X射线激励电压的增大先增大后减小，随辐照时间的增加先增大后减小。经过X射线辐照处理后大部分处理的PPO活性要小于对照组。 　　关键词：黑花生紫1F4；X射线；多酚氧化酶（PPO）活性； 辐照 　　中图分类号：S565.2；Q506；Q544+.1 文献标识码： A 文章编号：0439-8114（2013）19-4589-02 　　多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，PPO）是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中，甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性。由于其检测方便，是被最早研究的几类酶之一。1883年Yoghid发现日本漆树液汁变硬可能和某种活性物质相关，1938年Keilin和Mann研究了蘑菇多酚氧化酶的提取和纯化，得到多酚氧化酶并将这类酶称为Polyphenol oxidase。由于其能有效催化多酚类化合物氧化形成相应的醌类物质，因此被认为是导致酶促褐变反应的主要因素[1]。多酚氧化酶与植物的抗逆性有关，可以增加植物对病原体的抗性[2]。目前，在各种有机酸对PPO活性的影响方面有较多的报道，如Dedeoglu等[3]发现草酸能抑制蘑菇PPO活性；Nirmal等[4]报道了阿魏酸可以抑制PPO的活性从而改善冷藏过程中果蔬的品质；烷基苯甲酸对马铃薯的PPO也有明显的抑制作用[5]；柠檬酸是食品工业中常用的一种护色剂，对PPO具有明显的抑制作用，Jiang等[6]发现柠檬酸能够明显抑制荔枝的PPO活性，Demir等[7]发现苹果PPO也能被柠檬酸抑制，Wuyts等[8]报道柠檬酸对香蕉PPO同样具有抑制作用。花生是我国重要的经济作物，提高花生植株的抗逆性及花生的产量、质量等是一个重要的课题。因此，对黑花生种子进行X射线辐照处理后提取真叶的PPO并对其PPO活性进行研究，有利于开展黑花生的育种工作。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　PC-1600紫外光谱仪（上海美谱达公司）；CM-5分光测色仪（日本柯尼卡美能达公司）；高速离心机，手提式X射线透射仪。以黑花生紫1F4为试验材料。 　　1.2 种子处理 　　把黑花生紫1F4种子分为30组分别放在激励电压为45、50、55、60、65 kV的X射线下，种子胚部朝向束流方向且单层排列分别处理1、2、3、4、5、6 min后种植，长出真叶备用。 　　1.3 PPO提取 　　1.4 PPO活性测定 　　2 结果与分析 　　2.1 不同X射线激励电压下PPO活性与辐照时间的关系 　　2.2 不同辐照时间下PPO活性与X射线激励电压的关系 　　3 结论 　　在X射线激励电压为60 kV，辐照时间为5 min时黑花生紫1F4叶片中PPO活性最大，为559.8 U。在X射线激励电压为65 kV，辐照时间为3 min时PPO活性最低，为145.8 U。从试验结果可以看出，PPO活性随处理条件的变化没有明显的线性关系，但是总体上随着X射线激励电压的增大PPO活性先增大后减小，随着辐照时间的增加PPO活性先增大后减小。经过X射线辐照处理后大部分处理组的PPO活性要小于对照组。随着处理条件的变化PPO活性变化有较大的波动，当X射线激励电压较大时，PPO活性较低，这可能是因为X射线能量过高会引起分子的极化，使电子跃迁至高能级引起电离，促使化学反应发生，从而损害了DNA的结构，影响了PPO的表达，使得PPO的活性降低。 　　参考文献： 　　[1] BHATTACHARYA M， LUO Q， CORKE H. Time-dependent changes in dough color in hexaploid wheat landraces differing in polyphenoloxidase activity[J]. J Agric Food Chem，1999，47（9）：3579-3585. 　　[2] 谢春艳，宾金华，陈兆平.多酚氧化酶及其生理功能[J].生物学通报，1999，34（6）：11-13. 　　[3] DEDEOGLU N， GULER O O. Differential in vitro inhibition of polyphenoloxidase from a wild edible mushroom Lactarius salmonicolor[J]. Journal of Enzyme Inhibit