生物选修专题基因工程(医学健康).pptVIP

专题1:基因工程 基因工程的概念 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 1.1 DNA重组技术的基本工具 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （1）性质： 一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。 （2）分布： 主要在原核生物中。迄今从不同的微生物中分离出了约4000种限制酶。 （3）限制酶在原核生物中的作用是什么吗？ 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶是原核生物的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效，达到保证自身的安全的目的。 （4）为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解；含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 （5）限制酶所识别的序列有什么特点？ 所识别序列的中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 （5）作用结果：产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 （6）用同一种限制性酶处理不同DNA片段，会形成同样的黏性末端，可进行重组。 2、DNA连接酶——“分子缝合针” （1）作用：将双链的DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 （2）种类： E·coli DNA 连接酶 从大肠杆菌中分离得到，只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。 T4 DNA 连接酶 从T4噬菌体中分离得到，既可“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。 （3）DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ 不是一回事。 相同点： 两者都是形成磷酸二酯键。 不同点： DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板。 3、基因进入受体细胞的运载体 常用运载体：质粒、噬菌体、 动植物 病毒 质粒 存在：存在于细菌及酵母菌的染色体以外。 特性：是很小的环状DNA分子，在细胞染色体外能够自我复制。 大肠杆菌质粒的分子结构示意图 大肠杆菌质粒的分子结构示意图 天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？ 作为运载体的条件： （1）必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到运载体上去，而且这些位点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 （2）必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3）必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 （4）必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到受体细胞外的其他生物细胞中的。 （5）分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作。 故天然的DNA分子一般不能直接用做基因工程运载体。 1.2、基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取； 2、基因表达载体的构建； 3、将目的基因导入受体细胞； 4、目的基因的检测与鉴定； 1、目的基因的获取 目的基因是人们所需要转移或改造的基因，获取目的基因是实施基因工程的第一步 。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 人工合成基因法 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？ 1）DNA序列自动测序仪： 对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。 2）PCR技术： 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。 利用PCR技术扩增目的基因 3）从基因文库中获取目的基因： 基