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米糠多糖脱蛋白方法及条件的优化 　　摘要：木瓜蛋白酶结合三氯乙酸（TCA）法对米糠粗多糖进行脱蛋白，研究不同的酶添加量、酶解温度、酶解pH、酶解时间、TCA用量、TCA处理次数、TCA处理时间对米糠粗多糖脱除蛋白效果和多糖损失的影响。结果表明，米糠粗多糖脱蛋白最佳工艺条件为酶添加量140 U/mL，酶解最适温度55 ℃，最适pH 6.0，时间60 min；再用6% TCA作用30 min，3次重复，蛋白质脱除率为85.52%，多糖损失率为11.20%。 　　关键词：米糠多糖；脱蛋白；三氯乙酸（TCA）法；蛋白质脱除率；多糖损失率 　　中图分类号：TS210.9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）20-5014-04 　　Removing Protein and Optimizing Condition from Rice Bran Polysaccharide 　　XUN Yun1，ZHANG Ying-qing2 　　（1.Biological Engineering Institute，Wuhan Institue of Technology， Wuhan 430072，China； 　　2.Bioengineering College， Hubei University of Technology，Wuhan 430068，China） 　　Abstract： The technology of protein removing from rice bran polysaccharide was studied by the combination of papain and trichloroacetic acid（TCA）.The results showed that the best technological conditions were as the follows enzyme dosage 140 U/mL，hydrolysis temperature 55 ℃， pH 6.0， 60 min. Then the polysaccharides were treated with 6% TCA three times for 30 min， the rate of protein-removing was 85.52% and the rate of polysaccharide-losing was 11.20%. 　　Key words： rice bran polysaccharide； protein removing； trichloroacetic acid（TCA） method； the rate of protein-removing； the rate of polysaccharide-losing 　　多糖是与人类生活紧密相关的一类生物高分子物质，具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗病毒、降血脂、抗凝血等多种生物活性。米糠是稻谷加工过程中的农副产物，通常米糠含油脂14%～24%、蛋白质12%～18%、无氮浸出物33%～35%、水分7%～14%、灰分8%～12%，此外还含有生育酚、生育三烯酚、脂多糖、谷维素、二十八碳烷醇、？琢-硫辛酸、角鲨烯、神经酰胺等多种天然抗氧化剂和生理功能卓越的生物活性物质。米糠中无氮浸出物主要为淀粉、纤维素和半纤维素，一部分半纤维素构成了水溶性米糠多糖（Rice bran polysaccharide，RBS），它是一种结构复杂的杂聚糖，由木糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖等组成[1-4]。 　　米糠多糖的提取方法有多种，包括传统热水浸提法、超声波辅助提取法、高压脉冲辅助提取法、微波辅助提取法等[5]。这些方法提取得到的米糠粗多糖都含有一定量的蛋白质。这些杂蛋白影响了米糠多糖的结构和功效。故脱除米糠粗多糖中的杂蛋白并保留米糠多糖十分重要[6]。 　　传统Sevag法和三氯乙酸（TCA）法去除蛋白质通常需要重复10次，费时，样品损失很大，而且需要处理废液[7]。而酶法是利用蛋白酶将粗多糖中的蛋白质水解，条件温和，效率高[8]，但此法往往会引入新的蛋白质杂质。所以与TCA法相结合可取得较好的效果。试验以脱蛋白质率和多糖损失率为指标，采用木瓜蛋白酶法结合TCA法研究米糠粗多糖脱蛋白工艺，通过对各工艺参数进行优化，确定最佳工艺条件，以期为米糠粗多糖的纯化提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 米糠 米糠购自湖北百信食品有限公司研发中心。 　　1.1.2 试剂 α-淀粉酶、木瓜蛋白酶购自广州利源化工有限公司；葡萄糖、三氯乙酸、98%浓硫酸、75%乙醇、氯化钠、氯化氢、氢氧化钠、