Biovue血型卡在新生兒溶血病检测中的应用.docVIP

母婴血型不合导致新生儿溶血病的实验室检查 母儿ABO血型不合,激活母体免疫系统,产生对胎儿红细胞抗原的特异抗体,其中IgG抗A (B)抗体是引起新生儿溶血病(HDN)的主要原因之一。现在临床上常用经典抗人球蛋白法(经典法)检测血清IgG抗A (B)抗体预测HDN发生的可能性,此方法操作复杂且耗时长,限制了临床的应用。柱凝集试验操作简便，结果准确，敏感度高，标本用量少等原因迅速替代了经典的抗人球蛋白试验，成为各医院的首选方法。现就Biovue柱凝集试验在母婴不合新生儿溶血病中的应用及操作程序注意事项等逐一介绍。 产前诊断 夫妇抗体效价的测定 母婴不合导致新生溶血病的前提条件是母亲有针对胎儿的IgG型抗体。并且抗体的效价达到一定程度才可能发生新生儿溶血病。因此在产前测定母亲体内的IgG型抗体效价是预测胎儿是否发生新生儿溶血非常重要的产前诊断试验。 母婴血型是否相容是测定夫妇抗体效价的先决条件，因采集胎儿血液标本非常困难，可取父亲的标本，确定ABO血型是否相容。在临床上母亲O型血，父亲A、B或者AB型血需要检测ABO抗体效价。A型或B型的母亲发生新生儿溶血病的几率非常小，在临床上基本不做产前检查。 使用Biovue抗人球蛋白IgG 卡测定ABO抗体效价测定程序 1、配制中和血清。取母亲血清和二巯基乙醇各200微升，充分混匀。 2、将中和血清置于37℃水浴30分钟，以充分破坏血清中的IgM类抗体。 3、取6支干净试管排于试管架上。 4、将第一管加入50微升中和血清和350微升Bilss液。 5、第2－6管中分别加入200微升Bilss液。 6、从第一管中吸出200微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出200微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。 7、取Biovue Coombs（IgG）卡，撕去铝箔，在六管中个依次加入倍比稀释好的血清40微升和0.8％的父亲红细胞悬浮液（用Bliss配制）50微升。 8、将加好样的Coombs放入Biovue孵育器中孵育10－30分钟。 9、将孵育好的Coombs卡放入Biovue离心机中离心5分钟，（离心必须在加样后30分钟内进行） 10、从微柱正反两方面进行结果的判读。 用BioVue做夫妇抗体效价的测定具有操作简便、重复性好、结果判读简单等优点，但由于柱凝集系统的灵敏程度较高，与经典的抗人球蛋白试验测定的结果不能完全符合，因此在AABB中不建议使用柱凝集系统做夫妇抗体效价：“Do not use enhancement techniques [albu- min, polyethylene glycol, low- ionic- strength saline (LISS)] or enzyme-treated red cells because falsely elevated titers may be obtained. Gel testing is not recommended. 在李勇主编《实用血液免疫学—血型理论和实验技术》也有相关的描述 “MGIA不能用于吸收放散试验，再如经常在临床常规应用的抗体效价检测中也不能应用微柱凝胶试验（倍比稀释血清）1。 从理论上使用柱凝集系统进行抗体效价的测定是符合原理的。在一些国内的文献资料中，建议自己建立正常值，正常的滴度范围应该增加1－2个滴度。在微柱凝胶法检测1610例O 型血孕妇IgG抗体效价的研究一文中“通过长期临床实践及BioVue系统工作站应用经验,采用了1: 256作为临界值,当IgG抗A (B)效价≥1: 256时,即给予中药免疫抑制治疗,当效价为1: 128时,即给予密切关注,每四至六周后复查一次,如抗体效价快速上升或≥1: 256时,即给予治疗。较好地帮助临床早期诊断,早期治疗,有效地减少了HDN的发生,降低HDN的损害程度,保证优生优育”。2 二、产后诊断 诊断是否已经发生可新生儿溶血病 在新生儿溶血病的检验中除检查母子的血型是否相合外，诊断ABO新生儿溶血病最有力的证据是正式患儿红细胞被来自母亲的IgG抗A（B）抗体致敏，因此以下三个试验来确定是否发生新生儿溶血病。 患儿红细胞直接抗人球蛋白试验 如果患儿红细胞已经被致敏，则直接抗人球蛋白试验应该为阳性的结果，但由于ABO新生儿的A（B）抗原量少，所以被结合的抗体亦很少，多数呈弱阳性的混合外观或阴性结果。如果使用敏感性高的柱凝集系统做直接抗人球蛋白试验可大大提高其阳性率。 操作步骤如下： 取患儿血液，离心，洗涤，取压积红细胞用生理盐水配制成3－5％的红细胞悬液。 在抗人球蛋白（IgG）卡上标注患儿的姓名或者编号，撕开卡上的铝箔。 将10微升3－5％红细胞悬液加入到相应的孔中。 离心5分钟。 判断结果。 二、由于直接抗人球蛋白试验的灵敏度相对较低，因此还需