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壳聚糖酶的分离纯化及性质研究 　　摘要：利用芽孢杆菌（Bacillus sp.）Yg菌株发酵产壳聚糖酶，采用分段醇析法分离纯化发酵产物，通过不连续SDS法测定壳聚糖酶相对分子质量。结果表明，发酵产物先用体积分数40%的乙醇初步醇析，离心去除沉淀，而后加乙醇至体积分数为60%再次醇析，所得沉淀冷冻干燥即为壳聚糖酶，所得酶的回收率和纯度均较高。所得壳聚糖酶的相对分子质量约为41.7 ku，最适反应温度为45 ℃，最佳反应pH为5.5。该酶在4 ℃条件下保存稳定性较好，在65 ℃及以上温度下短时间内即全部失活。 　　关键词：壳聚糖酶；发酵；纯化；酶活力；稳定性 　　中图分类号：TQ925+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3647-03 　　壳寡糖为壳聚糖降解产物，具有水溶性好、易吸收、无毒、无变异性的特性，具有很高的生物活性，应用领域广泛[1，2]。壳聚糖酶是专一性水解壳聚糖生成壳寡糖的酶，壳聚糖酶水解法是目前制备壳寡糖的最佳方法[3]。我国目前还没有自主研发的壳聚糖酶制品，壳聚糖酶的研究与开发利用已成为我国壳寡糖生产和应用的关键与瓶颈。本研究利用前期自行分离获得的产壳聚糖酶芽孢杆菌（Bacillus sp.）Yg菌株发酵产壳聚糖酶，对产物进行分离、纯化，并对壳聚糖酶的相关性质进行了研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　芽孢杆菌Y