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斑玉蕈液体菌种培养条件及搔菌时间的筛选 　　斑玉蕈（真姬菇）； 液体菌种； 最佳培养基； 摇瓶培养； 搔菌 　　斑玉蕈（Hypsizigus marmoreus）又名真姬菇、蟹味菇、海鲜菇，隶属于伞菌目（Agaricales），白蘑科（Tricholomataceae），玉蕈属（Hypsizigus），是一种极具发展前景的珍稀食用菌[1]。它含有丰富的蛋白质、氨基酸和维生素，具有高蛋白、低脂肪、低热量的特点，近年来深受消费者青睐[2]。斑玉蕈是目前生长周期最长的工厂化食用菌品种，利用传统的固体菌种生产工艺，生产周期长，生产环节多，周期长、污染不易控制[3]。在香菇、黑木耳、金针菇、糙皮侧耳的工厂化生产中已有有采用液体菌种接种的报道[4]，液体菌种接种，菌丝球数量多、萌发点多、生长速度快、不宜污染、周期短、成本低、适宜工厂化栽培[5]。目前已有一些关于斑玉蕈液体菌种培养基筛选的相关报道[59]，在这些研究基础上笔者通过摇瓶培养，探寻斑玉蕈液体菌种培养的最佳条件，并通过栽培试验考察了不同搔菌时间对子实体产量的影响，以期为采用液体菌种工厂化栽培斑玉蕈提供理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1菌种 　　斑玉蕈菌种（H. marmoreus）XF1由上海丰科生物科技股份有限公司提供。 　　1.2培养基 　　母种培养基：PDA培养基。 　　摇瓶培养基配方1：2%蔗糖，0.2%麸皮，0.15% KH ？PO4，0.05% MgSO4；配方2：2%蔗糖，0.2%酵母膏，0.20% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方3：2%蔗糖，0.2%蛋白胨，0.30% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方4：2%红糖，0.2%麸皮，0.20% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方5∶2%红糖，0.2%酵母膏，0.30% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方6：2%红糖，0.2%蛋白胨，0.15% KH2PO4，0.05% MgSO4；配方7：2%葡萄糖，0.2%麸皮，0.30% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方8：2%葡萄糖，0.2%酵母膏， 0.15% KH2PO4，0.05% MgSO4；配方9：2%葡萄糖，0.2%蛋白胨，0.20% KH2PO4，0.10% MgSO4。每个配方中另添加20%马铃薯和0.001% VB1 　　栽培料：20%木屑，35%玉米芯，26%米糠，14%麸皮，5%玉米粉，65%含水量。 　　1.3方法 　　1.3.1液体菌种培养条件的筛选 　　1.3.1.1摇瓶培养基配方试验 　　将1.2中配好的9种摇瓶培养基装于250 mL三角瓶中，150 mL/瓶，121 ℃，灭菌30 min，冷却后接入5块（5 mm×5 mm）活化菌块（斜面菌种接种于PDA平板上，于22 ℃恒温培养15 d），25 ℃，150 r/min培养8 d后测定菌丝体生物量及菌球直径[5]。菌丝体生物量测定：培养液于4172 g离心10 min，收集菌丝体，80 ℃烘至恒重，称量。菌球直径测定：随机取培养液中10个菌丝球，在培养皿中排成一列，测总长度求平均值。每处理设3个重复。选择菌丝体生物量高的配方为最佳摇瓶养基。 　　1.3.1.2培养基最适起始pH值试验 　　采用1.3.1.1筛选出的最佳培养基，用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl将培养基的起始pH值调至4.0、5.0、6.0、7.0和8.0，测定培养基起始pH值对菌丝体生物量的影响，其它条件同1.3.1.1。 　　1.3.1.3培养时间试验 　　选用1.3.1.1和1.3.1.2确定的最佳培养基及起始pH培养斑玉蕈液体菌种10 d，其它条件同1.3.1.1。每隔1 d取样，测量菌丝体生物量。 　　1.3.1.4培养基装量试验 　　选用1.3.1.1和1.3.1.2确定的最佳培养基及起始pH值，250 mL三角瓶装液量分别为70、90、120、150和180 mL。培养条件采用1.3.1.1、1.3.1.2和1.3.1.3筛选出的最佳条件。测定不同装液量对菌丝体生物量的影响。 　　1.3.2栽培试验 　　1.3.2.1液体菌种制备 　　采用1.3.1中筛选的最佳培养条件培养一级摇瓶菌种。一级摇瓶菌种按50 mL/瓶接种在已灭好菌的750 mL培养瓶中，每瓶装液 开？00 mL，22 ℃、120 r/min培养3 d，其它采用1.3.1中筛选的最佳条件。 　　1.3.2.2出菇试验 　　1.3.3数据分析 　　2结果与分析 　　2.1液体菌种培养条件 　　配方试验结果表明配方6得到的菌丝体生物量最大，因此最佳摇瓶培养基配方为：20%马铃薯、2%红糖、0.2%蛋白胨、0.15% KH2PO4、0.05%